[发明专利]一种发根农杆菌K599介导的菊花转基因方法无效

专利信息
申请号: 201010511106.X 申请日: 2010-10-19
公开(公告)号: CN102010877A 公开(公告)日: 2011-04-13
发明(设计)人: 向太和;王琳;蒋欢;田璟鸾 申请(专利权)人: 杭州师范大学
主分类号: C12N15/82 分类号: C12N15/82;A01H4/00;A01H5/00
代理公司: 杭州天正专利事务所有限公司 33201 代理人: 黄美娟;冷红梅
地址: 310036 浙江*** 国省代码: 浙江;33
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摘要:
搜索关键词: 一种 发根 杆菌 k599 菊花 转基因 方法
【说明书】:

(一)技术领域

发明涉及一种发根农杆菌K599介导的菊花转基因方法。

(二)背景技术

菊花(Dendranthema morifolium)属于菊科菊属的植物,原产我国,是我国十大传统名花和世界四大切花之一,也是集文化意义和经济价值于一体的名品花卉,并有食用和药用价值(戴思兰等,菊属系统学及菊花起源的研究进展,北京林业大学学报,2002,24(5/6):230-234)。株形、花型和花色是影响菊花等花卉品质的重要的因素,而植物转基因技术在改良花卉品质中起着重要作用,邵寒霜等、Petty等、Zheng等先后报道利用转基因技术将lef、phyA、Phy B-1等基因转入菊花,使菊花的形态和花期等发生了改变(邵寒霜等,拟南芥LFY cDNA的克隆及转化菊花的研究,植物学报,1999,41(3):268-271;Petty et al,Modifying chrysanthemum(Dendranthema grandiflorum)growth habit genetic manipulation,Acta Hort,2000,508:319-321;Zheng et al,Modification of plant architecture inchrysanthemum by ecotopic expression of the tabacco phytochrome B1 gene,J Amer Soc Hort Sci,2001,126(1):19-26)。对于株型,用于盆栽或地被用途的菊花,往往需要植株矮化、分枝性强、着花数目多等特征。目前,改变观赏植物的株形,常用的基因是来自发根农杆菌Ri质粒的rol基因(Zuker et al,rolC-transgenic carnation with improved horticultural traits:quantitative and qualitative analysis of greenhouse-grown plants,J Am SocHort Sci,2001,126:13-18)。Kiyokawa等将发根农杆菌rolA、B、C基因转入了球根秋海棠中,结果观察到植株矮化、延迟开花,叶和花瓣均变皱(Kiyokawa et al,Genetic transformation of Begonia tuberhybrida by Ri rolgenes,Plant Cell Reports,1996,15(8):606-609)。Handa等将rol基因导入龙胆属植物草龙胆(prairie gentian)中,除了观察到转基因植株矮化、叶变皱之外,还观察到花冠呈杯状变化(Handa et al,Genetic transformationof Eustoma grandifiorum with rol gene,Acta Hort,1995,392:209-218)。Zuker等用基因枪和根癌农杆菌相结合的方法,将rol基因导入香石竹中,rol基因减少了香石竹腋芽的产生,增强发根的能力。Dolgov等将rolC基因导入菊花品种‘White Snowdon’中,获得两个转化系,其中有一个系与对照相比,表现为丛生、矮化,并且叶多分裂(Dolgov et al,Agrobacterialtransformation of chrysanthemum,Acta Hort,1997,447:329-334)。此外,有研究报道利用农杆菌转基因法将不同功能的目的基因转入菊花(傅荣昭和刘敏,通过根癌农杆菌介导法获得菊花转基因植株,植物生理学报,1998,24(1):72-76;王关林等,雪花莲凝集素基因转化菊花及转基因植株的抗蚜性研究,遗传学报,2004,31(12):1434-1438;洪波等,AtDREB1A基因在菊花中的异源表达提高了植株对干旱和盐渍胁迫的耐性,中国科学(C辑),2006,36(3):223-231;洪波等,地被菊花Fall Color体细胞胚途径再生,遗传转化及转基因植株的抗寒性检测,中国农业科学,2006,39(7):1443-1450;孙磊等,利用双T-DNA载体系统获得无选择标记转基因菊花,园艺学报,2008,35(5):727-734,姜丹等,拟南芥花期基因FT转化切花菊‘神马’,园艺学报,2010,37(3):423-430),但上述报道中菊花的再生效率偏低。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种菊花再生效率高的发根农杆菌K599介导的菊花转基因方法。

本发明采用的技术方案是:

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