[发明专利]一种人工椎间盘复合体组织及其制备方法

权利要求书

1.一种人工椎间盘复合体组织，其外层为纤维环细胞在脱矿脱细胞骨基质环生长构成的纤维环，内层为髓核细胞以及II型胶原、透明质、硫酸软骨素构成的髓核，是由髓核细胞及纤维环细胞在II型胶原、透明质、硫酸软骨素以及由脱钙脱细胞的骨基质环构成的纤维环复合体支架上生长形成。

2.根据权利要求1所述的人工椎间盘复合体组织，其特征在于，所述骨基质环为兔股骨髁部制备的骨基质环。

3.根据权利要求1所述的人工椎间盘复合体组织，其特征在于，所述髓核细胞及纤维环细胞来源于3周龄新西兰大白兔。

4.一种人工椎间盘复合体组织的构建方法，包含以下步骤：

步骤1：将除骨膜、除骨髓的兔股骨髁部，进行脱细胞脱钙处理后修整成形制备纤维环支架；

步骤2：将II型胶原和透明质酸按体积比9∶1混合注入步骤1制备的纤维环支架内，冷冻干燥后浸泡于pH为5.5含50-55mmol/l MES的40-45％乙醇溶液中30分钟后，浸泡于含50-55mmol/l MES、24-27mmol/l EDC、3-5mmol/l琥珀酰胺和2-3wt％硫酸软骨素的40-45％乙醇溶液中交联形成髓核纤维环复合体支架；

步骤3：加培养液使髓核细胞及纤维环细胞于所述髓核纤维环复合体支架内生长至12周。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤1所述脱细胞采用Courtman的中性去污剂-酶四步脱细胞方法进行。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤1所述脱钙为将兔股骨髁部在4℃0.6-0.8mol/L HCl中处理48-72小时。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤2所述交联为20-25℃下交联24-36h。

8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤3所述培养液为pH7.4-7.6含10-15％FBS的DMEM/F12培养液。

9.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述髓核细胞及所述纤维环细胞来源于3周龄新西兰大白兔，其浓度为1×10⁵-2×10⁵个/ml。

10.根据权利要求4-9任一项所述制备方法制备的人工椎间盘复合体组织。