[发明专利]一种奶牛隐性子宫内膜炎早期诊断试剂盒

说明书

(一)技术领域

本发明涉及免疫学检验技术，具体说就是一种奶牛隐性子宫内膜炎早期诊断试剂盒。

(二)背景技术

自1896年G.Widal和A.Sicad应用凝集反应诊断伤寒起，免疫学就与医学检验结下不解之缘，至今已经历了一个世纪。随着免疫学技术的发展，免疫学检验已成为兽医临床检验中的一个重要部分。

免疫学检验的检测对象是具有免疫活性的物质，内容包括检测方法和临床意义。免疫学检验可分为细胞免疫检验和体液免疫检验两大类，免疫活性细胞及其功能的检测属于前者，抗原、抗体、补体等的检测属于后者。

近年来免疫学检验飞跃发展，在各种疾病的诊断和防治中起着日益重要的作用。免疫学检验在传染病的诊断中应用广泛，大部分传染病病原体及其抗体的检测已在实验室中作为常规检验。由于新技术的发展，许多与免疫无关的物质亦可作为免疫原而制备其相应抗体并用于这些物质的测定。利用抗原体反应来测定标本中微量物质的方法称为免疫测定(immunoassay)。免疫测定具有高度的特异性和敏感性，在临床检验中已用于测定各种蛋白质、酶、激素、药物等。

抗原与抗体能够特异性结合是基于两中分子间的结构互补性与亲和性，这两种特性是由抗原与抗体分子的一级结构决定的。抗原抗体反应可分为两个阶段。第一为抗原与抗体发生特异性结合的阶段，此阶段反应快，仅需几秒至几分钟，但不出现可见反应。第二为可见反应阶段，抗原抗体复合物在环境因素(如电解质、pH、温度、补体)的影响下，进一步交联和聚集，表现为凝集、沉淀、溶解、补体结合介导的生物现象等肉眼可见的反应。此阶段反应慢，往往需要数分钟至数小时。实际上这两个阶段以严格区分，而且两阶段的反应所需时间亦受多种因素和反应条件的影响，若反应开始时抗原抗体浓度较大且两者比较适合，则很快能形成可见反应。

隐性子宫内膜炎由于临床诊断困难，而且潜在的危害性严重，所以近年来，国内外不少学者都在探索对该病的快速、早期、简易诊断方法，同时也获得了很大进展，如冲洗液沉淀法，是将子宫内冲洗回流液静置后发现有沉淀物，或见到蛋白样或絮状物浮游时，可作出初步诊断，但本方法的主观性较强一些，因为对于沉淀物性状的判断因检验者的视觉不同而不一样。

隐性子宫内膜炎是子宫内膜慢性的不明显的炎症过程，而且子宫内膜上有大量的嗜中性粒细胞浸润，这个炎症过程抑制了奶牛的繁殖力。认为嗜中性粒细胞的比例“相对较高”的判定标准，取决于采样的技术及分娩的时间。国外学者通过对分娩后临床表现正常的、泌乳20-30天奶牛的研究，证实子宫内膜的细胞学与超声波检查可作为隐性子宫内膜炎的诊断工具。包括直肠触诊、子宫内膜细胞学检查和超声波检查在内的检查要在第一次检查后的两周重新作一次，例如在泌乳的34-47d。用于子宫内膜细胞学分析样本的采集是通过改良的应用于细胞刷技术获得，在显微镜的载玻片上转动、固定、用经过改良的瑞士-姬姆萨染色液染色。与相对较低的妊娠率有关的因素已经被确定并可以作为诊断隐性子宫内膜炎的标准：(1)泌乳20-33天确定子宫内膜PMN(中性粒细胞)的数量＞18％；(2)泌乳34-47天确定子宫内膜PMN的数量＞10％；(3)子宫内液体可做任何检查。Gilbert等(2005)应用另一种技术，从泌乳40-60天的奶牛子宫冲洗液中获取子宫内膜细胞样本。由于样本是2-5ml的液体，所以在染色前必须重新悬浮样本并通过细胞涂片离心机转移到显微镜的载玻片上。采用瑞士-姬姆萨染色，PMN的下限是5％，作为诊断隐性子宫内膜炎的标准。Foldi等认为子宫的直肠检查对隐性子宫内膜炎没有诊断价值。IIIипилo B等报道，可用精液作生物学诊断，在加温(38℃)的载玻片上分开滴2滴精液，将子宫分泌的粘液加入其中的一滴精液中，用干净盖玻片盖住两个液滴，置显微镜下观察，如果精子在粘液中逐渐不运动或被凝集，说明发生了隐性子宫内膜炎。金子一幸等报道，可通过检查发情期子宫颈口粘液中的白细胞诊断隐性子宫内膜炎，即取发情期宫颈外口粘液，涂片，晾干，姬姆萨染色后镜检，全视野无白细胞为(-)，散在点状存在为(+)，全视野中有白细胞密集者为(+++)，介于(+)和(+++)为(++)。Γa B p иш报道，用牛尿液与硝酸银作用可诊断隐性子宫内膜炎，方法是取被检牛尿液2ml放入清洁的试管里，加入5％硝酸银溶液1ml，加热煮沸2min，试管底部有黑色沉淀物的为阳性反应，褐色或色泽较淡的为阴性反应。