[发明专利]一种具有抗肿瘤活性的翠绿针毛蕨总黄酮制备方法及其含量测定方法

权利要求书

1.一种具有抗肿瘤活性的翠绿针毛蕨总黄酮的含量测定方法，包括以下步骤：

(1)将纯度在98％以上的原芹菜素做为对照品，用甲醇配制成梯度的标准溶液，在262nm波长下，分别测定标准溶液的吸光度值，根据吸光度值和对应的浓度建立标准曲线；

(2)将翠绿针毛蕨提取物用甲醇溶解配制成待测溶液，在262nm波长下测吸光度，根据所得吸光度值由标准曲线计算出待测溶液浓度，然后根据稀释倍数换算成翠绿针毛蕨提取物中总黄酮的含量。

2.一种具有抗肿瘤活性的翠绿针毛蕨总黄酮提取工艺，包括如下步骤：

a.以翠绿针毛蕨干燥全草为原料，将其洗净，晾干，粉碎，过40目筛，得翠绿针毛蕨原料粗粉；

b.将翠绿针毛蕨原料粗粉用乙醇、甲醇、60～90％含水乙醇、60～90％含水甲醇为提取溶剂，加热至70～90℃提取，所用有机溶剂量与翠绿针毛蕨原料粗粉重量比为6～15∶1，重复提取1～3次，除去药渣，滤液在减压条件下浓缩干燥得翠绿针毛蕨浸膏；

c.将所得翠绿针毛蕨浸膏超声溶解于蒸馏水中，用3～5倍量的石油醚萃取2～3次，合并水层，水层以碱溶液调PH值至5～7，优选PH值为6，过滤，得翠绿针毛蕨滤液；

d.将所得翠绿针毛蕨滤液以酸溶液调PH值至1～2，放置于4℃冰箱下过夜，次日过滤，滤液放置待用，所得沉淀用蒸馏水洗至中性，真空干燥即得翠绿针毛蕨碱提酸沉黄酮；

e.将上述步骤d中所述的滤液用大孔树脂吸附，以蒸馏水洗脱水溶性物质，再以50～70％的含水乙醇进行洗脱，洗脱液在减压条件下回收溶剂，浓缩干燥，即得翠绿针毛蕨大孔树脂黄酮；

f.合并上述翠绿针毛蕨碱提酸沉黄酮和大孔树脂黄酮，即得翠绿针毛蕨总黄酮。

3.根据权利要求2所述的提取工艺，其特征在于，步骤c中所述的用以调PH值的碱溶液是氢氧化钠或氨水。

4.根据权利要求2所述的提取工艺，其特征在于，步骤d中所述的用以调PH值的酸溶液是浓盐酸或浓硫酸。

5.一种具有抗肿瘤活性的翠绿针毛蕨总黄酮，其特征在于，它是以翠绿针毛蕨干燥全草为原料，按以下方法提取得到的产物：

a.以翠绿针毛蕨干燥全草为原料，将其洗净，晾干，粉碎，过40目筛，得翠绿针毛蕨原料粗粉；

b.将翠绿针毛蕨原料粗粉用乙醇、甲醇、60～90％含水乙醇、60～90％含水甲醇为提取溶剂，加热至70～90℃提取，所用有机溶剂量与翠绿针毛蕨原料粗粉重量比为6～15∶1，重复提取1～3次，除去药渣，滤液在减压条件下浓缩干燥得翠绿针毛蕨浸膏；

c.将所得翠绿针毛蕨浸膏超声溶解于蒸馏水中，用3～5倍量的石油醚萃取2～3次，合并水层，水层以碱溶液调PH值至5～7，优选PH值为6，过滤，得翠绿针毛蕨滤液；

d.将所得翠绿针毛蕨滤液以酸溶液调PH值至1～2，放置于4℃冰箱下过夜，次日过滤，滤液放置待用，所得沉淀用蒸馏水洗至中性，真空干燥即得翠绿针毛蕨碱提酸沉黄酮；

e.将上述步骤d中所述的滤液用大孔树脂吸附，以蒸馏水洗脱水溶性物质，再以50～70％的含水乙醇进行洗脱，洗脱液在减压条件下回收溶剂，浓缩干燥，即得翠绿针毛蕨大孔树脂黄酮；

f.合并上述翠绿针毛蕨碱提酸沉黄酮和大孔树脂黄酮，即得翠绿针毛蕨总黄酮。

6.根据权利要求5所述的具有抗肿瘤活性的翠绿针毛蕨总黄酮，其特征在于，步骤c中所述的用以调PH值的碱溶液是氢氧化钠或氨水。

7.根据权利要求5所述的具有抗肿瘤活性的翠绿针毛蕨总黄酮，其特征在于，步骤d中所述的用以调PH值的酸溶液是浓盐酸或浓硫酸。