[发明专利]一种具有抗肿瘤活性的翠绿针毛蕨总黄酮制备方法及其含量测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物药提取的具有抗肿瘤活性的总黄酮，具体涉及翠绿针毛蕨总黄酮及其制备方法，以及该总黄酮的含量测定方法。

背景技术

黄酮类化合物广泛存在于自然界，是一类重要的天然有机化合物，一般分为：黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇、花色素、查耳酮、双黄酮、异黄酮等。黄酮类化合物生物活性多种多样，如对心血管的作用，抗病毒作用，抗炎作用等，其中黄酮类化合物的抗肿瘤作用日益受到广泛关注。恶性肿瘤是严重威胁人类健康的常见病和多发病，药物治疗在恶性肿瘤疗法中占有重要的地位，其中从中草药中发现新的具有抗肿瘤活性的物质是一个重要的研究方向。

翠绿针毛蕨(Macrothelypteris viridifrons(Tagawa)Ching)为金星蕨科(Thelypteridaceae)针毛蕨属(Macrothelypteris)植物，又名假普通针毛蕨。植株高60～110cm，根状茎短而直立，先端被红棕色，具毛的披针形鳞片。叶簇生；叶柄长30～50cm，禾秆色，基部被灰白色的短针毛，向上光滑；叶片几与叶柄等长或略长，四回羽裂；羽片10～12对，互生或近对生，斜上，柄长11.5～5cm，基部一对最大，长圆批针形，渐尖头，基部略变狭，圆截形，第二对起向上的羽片和基部一对同行，但基部不变狭，渐次缩小，具短柄，三回羽裂；一回小羽片10～15对，互生，平展，二回羽裂；叶脉可见，侧脉单一，斜上，每裂片2～3对。叶为薄草质，干后草绿色，下面被较多的、长约1mm，开展的针状毛，上面沿小羽轴有较多的短针毛，叶轴禾秆色，下面光滑，有光泽。孢子囊群小，圆形，每裂片1～2枚，生于基部侧脉的近顶端；囊群盖小，圆肾形，绿色，膜质，背面略有1～2根长柔毛，成熟后不见。孢子圆肾形，周壁表面具较烯的小刺状和小穴状纹饰。广泛分布于长江以南各省，常见。本课题组通过对翠绿针毛蕨的化学成分进行研究得知该植物中含有大量类黄酮化合物，由于该类黄酮化合物有着非苯环的特殊B环结构，常用的的亚硝酸钠-硝酸铝等比色法不适用于该类黄酮的含量测定。

本发明涉及的翠绿针毛蕨总黄酮是从金星蕨科针毛蕨属植物翠绿针毛蕨(Macrothelypteris viridifrons(Tagawa)Ching)的干燥全草中提取纯化得到的抗肿瘤有效部位，试验证明该有效部位对各种肿瘤细胞具有明显的杀伤作用，体现了明显的抗肿瘤作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有抗肿瘤作用的翠绿针毛蕨总黄酮及其制备方法；

本发明的另一个目的是提供准确简便的翠绿针毛蕨总黄酮含量测定方法。

实现本发明的技术方案是：

本发明提供的具有抗肿瘤活性的翠绿针毛蕨总黄酮，是以翠绿针毛蕨干燥全草为原料，按以下方法提取得到的产物：

a.以翠绿针毛蕨干燥全草为原料，将其洗净，晾干，粉碎，过40目筛，得翠绿针毛蕨原料粗粉；

b.将翠绿针毛蕨原料粗粉用乙醇、甲醇、60～90％含水乙醇、60～90％含水甲醇为提取溶剂，加热至70～90℃提取，所用有机溶剂量与翠绿针毛蕨原料粗粉重量比为6～15∶1，重复提取1～3次，除去药渣，滤液在减压条件下浓缩干燥得翠绿针毛蕨浸膏；

c.将所得翠绿针毛蕨浸膏超声溶解于蒸馏水中，用3～5倍量的石油醚萃取2～3次，合并水层，水层以碱溶液调PH值至5～7，优选PH值为6，过滤，得翠绿针毛蕨滤液；

d.将所得翠绿针毛蕨滤液以酸溶液调PH值至1～2，放置于4℃冰箱下过夜，次日过滤，滤液放置待用，所得沉淀用蒸馏水洗至中性，真空干燥即得翠绿针毛蕨碱提酸沉黄酮；

e.将上述步骤d中所述的滤液用大孔树脂吸附，以蒸馏水洗脱水溶性物质，再以50～70％的含水乙醇进行洗脱，洗脱液在减压条件下回收溶剂，浓缩干燥，即得翠绿针毛蕨大孔树脂黄酮；

f.合并上述翠绿针毛蕨碱提酸沉黄酮和大孔树脂黄酮，即得翠绿针毛蕨总黄酮。

上述步骤c中所述的用以调PH值的碱溶液是氢氧化钠或氨水。

上述步骤d中所述的用以调PH值的酸溶液是浓盐酸或浓硫酸。

本发明制备翠绿针毛蕨总黄酮的方法简便，且重现性好，产品得率高。

本发明提供的具有抗肿瘤作用的翠绿针毛蕨总黄酮的药效如下：