[发明专利]一种荧光探针和用该探针快速检测金黄色葡萄球菌的方法

权利要求书

1.一种荧光探针，其特征在于，采用如下方法制备：

(1)制备以羧甲基壳聚糖为模板的CMCS/QDs量子点水溶液，将该量子点水溶液置于透过分子量为10,000道尔顿的透析袋中对蒸馏水透析3天；

(2)碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺分别溶解在蒸馏水中配成500mM～2μM的EDC溶液和500mM～2μM的NHS溶液，免疫球蛋白人IgG溶解在蒸馏水中配成0.5～5mg/ml的人IgG抗体溶液；

(3)取纯化的CMCS/QDs量子点溶液3ml加入0.45ml的EDC溶液和0.12ml的NHS溶液的混合溶液中室温活化3～6h，向混合溶液中加入0.1ml人IgG抗体溶液，室温避光反应8～12h；

(4)将反应后的产物在葡聚糖凝胶柱上分离，用蒸馏水透析3～5天，在小于40℃的温度下浓缩，即得到CMCS-QDs-IgG荧光探针。

2.根据权利要求1所述的荧光探针，其特征在于，所述量子点为CdS、ZnS、HgS、CdSe、ZnSe或HgSe。

3.根据权利要求1所述的荧光探针，其特征在于，所述量子点的粒径为2～7nm。

4.根据权利要求1或2或3所述的荧光探针，其特征在于，所述CMCS/QDs量子点水溶液的制备方法为：将羧甲基壳聚糖在室温下溶解于蒸馏水配置浓度为2.5～10mg/ml溶液，搅拌条件下向其中加入5×10^-4-10^-2mol/l金属前驱物溶液，并搅拌8～12h获得羧甲基壳聚糖金属络合物；向金属络合物溶液中通氮气保护，在＞1000r/m的高速搅拌下迅速加入新鲜配置的硫族前驱物水溶液，使得金属和硫的摩尔比为1∶3～3∶1之间，然后继续在氮气保护下将体系升温至80-100度回流2-3h，即获得羧甲基壳聚糖/量子点复合溶液；将上述产物在pH＝7.5的磷酸缓冲液中透析2天，凝胶过滤色谱柱纯化，浓缩得到CMCS/QDs量子点水溶液；所述金属前驱物溶液为醋酸镉溶液、醋酸锌溶液或醋酸汞溶液，所述硫族前驱物水溶液为硒化钠或硫化钠水溶液。

5.一种用权利要求1～4任意一项制备的荧光探针快速检测金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)接种单菌落待测细菌于5mL生理盐水中，制备三个平行样品；

(2)取900微升菌液加入100微升CMCS-QDs-IgG荧光探针，混和后37℃孵育30min；500rpm离心5～10min，去除上清后重悬于5ml、pH＝7.4的磷酸缓冲液，重复离心、洗涤，直至除去非特异性吸附的CMCS-QDs-IgG荧光探针；

(3)最后将细菌悬浮于5ml磷酸缓冲液中，测定菌悬液的OD500数值和450～650nm处的荧光强度。

6.根据权利要求5所述快速检测金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于，所述测定菌悬液的荧光强度所用的荧光波长为量子点的特征发射波长。