[发明专利]分析蛋白的抗原表位的方法

权利要求书

1.分析蛋白的抗原表位的方法，包括如下步骤：

(1)构建目的蛋白的DNA文库；所述DNA文库中，所述目的蛋白的编码基因的DNA片段插入T载体；所述T载体含有酵母a凝集素Aga2p的编码基因，且所述DNA片段编码的肽片段的N端与所述酵母a凝集素Aga2p的C端融合；

(2)将所述DNA文库展示在酵母表面，得到酵母展示文库；

(3)将目的蛋白的抗体与酵母展示文库混合，分选出与抗体结合的酵母；

(4)将筛选出的酵母提取质粒进行测序，根据插入所述T载体的DNA片段的核苷酸序列分析蛋白的抗原表位。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述T载体为在pCTCON2质粒的NheI和BamH I位点之间插入序列表的序列表3自5’末端第11至40位核苷酸所示的DNA得到的pCTCON2-T质粒；所述目的蛋白的DNA片段插入所述pCTCON2-T质粒的Xcm I酶切位点；所述酵母为酿酒酵母，优选为酿酒酵母EBY100。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述方法中，利用流式细胞术进行步骤(3)中的所述分选。

4.如权利要求1或2或3所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，将所述DNA文库展示在所述酵母表面包括如下步骤：

①提取所述DNA文库的质粒转化所述酵母，得到重组酵母；

②收集重组酵母诱导培养36小时以上，得到酵母展示文库；所述诱导是通过向培养酵母的体系中加入半乳糖实现的。

5.如权利要求1至4中任一所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，构建所述DNA文库的方法包括如下步骤：

(1)将目的蛋白的编码基因用DNase I进行消化，回收50-100bp的DNA片段；

(2)将步骤(1)回收的DNA片段进行随机片段重组；

(3)将步骤(2)重组后的DNA片段加A尾；

(4)将加A尾后的DNA片段插入所述pCTCON2-T质粒的Xcm I酶切位点，然后转化宿主菌，得到所述DNA文库。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述宿主菌为大肠杆菌，优选大肠杆菌DH5a。

7.如权利要求1至6中任一所述的方法，其特征在于：所述目的蛋白为序列表的序列1所示的蛋白；所述目的蛋白的编码基因优选序列表的序列2所示的DNA。

8.pCTCON2-T质粒，是在pCTCON2质粒的Nhe I和BamH I位点之间插入序列表的序列表3自5’末端第11至40位核苷酸所示的DNA得到的。

9.一种酵母表面展示系统，包括权利要求8所述的pCTCON2-T质粒和酵母。

10.如权利要求9所述的酵母表面展示系统，其特征在于：所述酵母为酿酒酵母，优选为酿酒酵母EBY100。