[发明专利]检测H1和H3亚型流感病毒的核苷酸序列和试剂盒

权利要求书

1.一组检测H1和H3亚型流感病毒的核苷酸序列，其核苷酸序列如序列表SEQID NO：1至SEQ ID NO：6，其中序列SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2分别为检测H1亚型流感病毒HA基因的正义引物和反义引物，序列SEQ ID NO：3为检测H1亚型流感病毒HA基因的LNA修饰的荧光探针，序列SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5分别为检测H3亚型流感病毒HA基因的正义引物和反义引物，序列SEQ ID NO：6为检测H3亚型流感病毒HA基因的荧光探针。

2.根据权利要求1所述的检测H1和H3亚型流感病毒的核苷酸序列，其特征在于：所述探针序列SEQ ID NO：3的5’端标记报告荧光基团HEX，3’端标记淬灭荧光基团TAMRA，第5、7、9、11位的碱基用LNA进行修饰。

3.根据权利要求1所述的检测H1和H3亚型流感病毒的核苷酸序列，其特征在于：所述探针序列SEQ ID NO：6的5’端标记报告荧光基团FAM，3’端标记MGB基团。

4.一种检测H1和H3亚型流感病毒的试剂盒，由以下组分组成：

1)裂解液

2)H1亚型单重荧光RT-PCR反应液，包括：PCR缓冲液、RT缓冲液、MgCL₂、dNTP、H1正义引物、H1反义引物和H1荧光探针

3)H3亚型单重荧光RT-PCR反应液，包括：RT缓冲液、MgCL₂、dNTP、H3正义引物、H3反义引物和H3荧光探针

4)H1和H3双重荧光RT-PCR反应液，包括：RT缓冲液、MgCL₂、dNTP、H1正义引物、H1反义引物、H1荧光探针，H3正义引物、H3反义引物、H3荧光探针

5)RT-PCR酶颗粒

6)Taq DNA聚合酶

7)DEPC水

8)阴性对照：流感病毒阴性组织样品，用0.01mol/L pH7.2PBS缓冲盐水制成20％悬液，70℃作用1小时；

9)阳性对照：为体外转录的非感染性RNA片段，其对应的DNA序列为序列表SEQID No.7和SEQ ID No.8所示的核苷酸序列；

其中，H1正义引物为序列表SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，H1反义引物为序列表SEQ ID No.2所示的核苷酸序列，H1荧光探针为序列表SEQ ID No.3所示的核苷酸序列，其5’端标记报告荧光基团HEX，3’端标记淬灭荧光基团TAMRA，第5、7、9、11位的碱基用LNA进行修饰，H3正义引物为序列表SEQ ID No.4所示的核苷酸序列，H3反义引物为序列表SEQ ID No.5所示的核苷酸序列，H3荧光探针为序列表SEQID No.6所示的核苷酸序列，其5’端标记报告荧光基团FAM，3’端标记MGB基团。

5.根据权利要求4所述的检测H1和H3亚型流感病毒的试剂盒，其特征在于，所述H1亚型单重荧光RT-PCR反应液包括：0.5×PCR缓冲液、0.5×RT缓冲液、1.5mmol/L MgCL₂、0.2mmol/L dNTP、0.3μmol/L H1正义引物、0.3μmol/L H1反义引物和0.3μmol/L H1荧光探针；

所述H3亚型单重荧光RT-PCR反应液包括：1×RT缓冲液、4mmol/L MgCL₂、0.05mmol/L dNTP、0.4μmol/L H3正义引物、0.4μmol/L H3反义引物和0.2μmol/L H3荧光探针；

所述H1和H3双重荧光RT-PCR反应液，包括：1×RT缓冲液、4mmol/LMgCL₂、0.05mmol/L dNTP、0.4μmol/L H1正义引物、0.4μmol/L H1反义引物、0.3μmol/L H1荧光探针、0.4μmol/L H3正义引物、0.4μmol/L H3反义引物、0.3μmol/L H3荧光探针。