[发明专利]具有苯磺酸衍生物内水相的脂质体

说明书

技术领域

本发明涉及一种具有苯磺酸衍生物盐内水相的脂质体及其制备方法，及其在制备用于治疗肿瘤疾病的药物中的用途。

背景技术

脂质体作为药物载体，具有提高药物疗效、减轻药物不良反应及靶向、缓释等特点，尤其是作为抗肿瘤药物的载体时可以使药物靶向肿瘤区而起到减毒、增效作用。

目前临床上应用的抗肿瘤药物众多，大致可分为细胞毒类、激素类、生物反应调节剂、单克隆抗体以及其他抗肿瘤药物这五类。其中细胞毒类药物占市场份额最大，其按照作用机制可以分为以下五类：(1)作用于DNA化学结构的药物，如：烷化剂和铂类；(2)影响核酸合成的药物，如：甲氨蝶呤、氟尿嘧啶等；(3)作用于核酸转录的药物，如：阿霉素、表阿霉素等；(4)作用于微管蛋白合成的药物，如：紫杉类、长春碱类；作用于拓扑异构酶的药物，如：喜树碱类；(5)其他细胞毒药。其中第二、四类药物具有细胞周期特异性，它们只对恶性肿瘤细胞增殖周期的某一间期细胞有杀灭作用，本发明重点研究的长春瑞滨和拓扑替康即为此类药物。

将细胞周期特异性抗肿瘤药物制备成脂质体，从而达到减毒增效的作用，需要控制脂质体中药物的释放速度。若药物从脂质体中释放过快则会导致如下结果：(1)一部分药物在到达瘤区之前即从脂质体中释放出来，接着在血液中被快速清除，而不能进入肿瘤区；(2)由于同一时间肿瘤细胞所处的生长周期各不相同，因此即使进入瘤区的药物也无法对处于非特定周期的肿瘤细胞产生杀伤作用，这样药物对肿瘤细胞的暴露大大减少，不利于药效的发挥，反而引起对正常组织细胞的毒性反应。所以，对于细胞周期特异性药物来说，控制药物从脂质体中的释放就显得尤为重要。

脂质体药物的释放受到多种因素的影响，包括粒度、脂膜组成、内水相以及载药方法等。脂质体的载药方法分为主动载药和被动载药两种，脂溶性药物一般选择被动载药技术，水溶性药物采用主动载药技术。由于长春瑞滨和拓扑替康均为水溶性弱碱性药物，所以选择主动载药技术来制备脂质体。目前常用的主动载药技术主要有三种，pH值梯度法、硫酸铵梯度法以及络合梯度法：

(1)pH值梯度法

该方法在19世纪80年代由加拿大学者发明，他们通过实验发现阿霉素等生物碱类药物由于pH值梯度的存在，可以实现主动转运，特异性的向脂质体内聚集。其制备过程为首先根据药物的性质选择内水相缓冲液和外相缓冲液，这一步骤非常关键，因为它直接决定了药物在储存期内的稳定性和药物在体内的释放行为。然后使用内水相缓冲液水化制备空白脂质体，将制得的空白脂质体经过进一步处理使其粒度降低到所需的范围后，则可以使用交叉流透析、柱层析以及pH值调整等手段置换脂质体的外相，造成磷脂膜内外的pH梯度。形成跨膜梯度后，可以在适宜的温度完成药物的装载。

也可以使用离子载体制造跨膜pH梯度。在制备空白脂质体的过程中，将2价离子盐，如硫酸锰包封在脂质体中，之后用含有离子载体如A23187和EDTA的缓冲液置换脂质体的外相。离子载体可以特异性的向膜外转运2价离子，同时将H⁺转移到脂质体内部。使用上述方法，同样可以制造膜内外的pH值梯度。

对于pH梯度法载药的机理，已经进行了较系统的研究。目前上市的3个蒽环类抗生素脂质体制剂中，有2个产品使用了pH值梯度法载药技术。

(2)硫酸铵梯度法

硫酸铵梯度法在20世纪90年代初期由以色列学者发明。该方法的制备过程和传统的pH值梯度法有相似之处。首先使用硫酸铵缓冲液制备空白脂质体，之后采用交叉流透析等手段除去脂质体外相的硫酸铵，造成脂膜内外的硫酸铵梯度，然后在加热的条件下完成药物的装载。起初的研究表明，硫酸铵梯度法之所以能够实现药物的装载，可能和游离的氨跨膜扩散，造成磷脂膜内外的pH值的差异有关。但是严谨的理论推导表明，使用硫酸铵梯度法完成药物的装载，可能是一个比较复杂的双向扩散的过程，pH值梯度的形成可能只是其中的一个影响因素。

硫酸铵梯度法的优势在于制备空白脂质体的过程中，接近中性的硫酸铵水溶液不会引起过多的磷脂分子水解。因为如果使用饱和磷脂制备脂质体，需要在较高的温度下完成。使用传统的pH值梯度法，可能使得磷脂更容易发生水解。此外，使用硫酸铵梯度法制备的脂质体，其在体内释放药物的行为可能也有所不同。

(3)络合梯度法