[发明专利]一种新型生物条形码检测方法及其应用

权利要求书

1.一种生物条形码检测方法，是在普通生物条形码检测方法的基础上，将标记的条形码DNA链改进为单链，并将其长度延长为适于进行荧光定量PCR/TaqMan荧光探针检测的长度，三明治反应复合物中条形码DNA链不用解离，直接用基于TaqMan荧光探针的实时荧光定量PCR方法或普通PCR方法对三明治反应复合物中条形码DNA链进行定性、定量检测的生物条形码检测方法。

2.根据权利要求1所述的生物条形码检测方法，其特征在于：所述生物条形码检测方法包括以下步骤：

(1)NP探针的制备：设计适用荧光定量PCR/TaqMan荧光探针检测的条形码DNA单链，然后利用金纳米颗粒、抗待测物的多克隆抗体和条形码DNA单链制备NP探针；

(2)MMP探针的制备：用磁性微球和抗待测物的单克隆抗体制备MMP探针；

(3)条形码DNA检测：利用NP探针、MMP探针和待测物通过抗原、抗体作用制备三明治复合物，然后将复合物上标记的条形码DNA链直接进行基于TaqMan荧光探针的实时荧光定量PCR检测或普通PCR检测，以对待测物进行定性、定量检测。

3.根据权利要求2所述的生物条形码检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中的金纳米颗粒直径为10～40nm，优选为15nm；用于生物条形码检测的单链条形码DNA链具有序列表中SEQ ID No：1的核苷酸序列。

4.根据权利要求2所述的生物条形码检测方法，其特征在于：所述步骤(2)中磁性微球的直径为0.5～3μm，优选为2.8μm。

5.根据权利要求2所述的生物条形码检测方法，其特征在于：所述步骤(3)中用于对条形码DNA链进行实时荧光定量PCR检测的引物对的上游引物具有序列表中SEQ ID No：2的核苷酸序列，下游引物具有序列表中SEQ ID No：3的核苷酸序列，TaqMan荧光探针具有序列表中SEQ ID No：4的核苷酸序列。

6.根据权利要求2所述的生物条形码检测方法，其特征在于：所述步骤(1)和步骤(2)中还包括对NP探针和MMP探针进行纯化的步骤。

7.权利要求1-6任一项所述的生物条形码检测方法在检测病毒、细菌、毒素、生物战剂、类固醇、脂类、维生素和肿瘤特异性标志物中目标蛋白的应用。

8.根据权利要求7所述应用，其特征在于：所述毒素为蓖麻毒素，目标蛋白为蓖麻毒素蛋白，检测中使用的MMP探针标记有抗蓖麻毒素蛋白的单克隆抗体，NP探针标记有抗蓖麻毒素蛋白的多克隆抗体；所述病毒为蓝舍病病毒，目标蛋白为VP7蛋白，检测中使用的MMP探针标记有抗VP7蛋白的单克隆抗体，NP探针标记有抗VP7蛋白的多克隆抗体。

9.一种生物条形码检测试剂盒，包括包被有抗待测物单克隆抗体的MMP探针，包被有抗待测物多克隆抗体和条形码单链DNA链的NP探针，以及用于实时荧光定量PCR检测的引物和TaqMan荧光探针。

10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于：所述与NP探针联结的条形码DNA链具有序列表中SEQ ID No：1的核苷酸序列；用于对条形码DNA链进行实时荧光定量PCR检测的引物对的上游引物具有序列表中SEQ ID No：2的核苷酸序列，下游引物具有序列表中SEQ ID No：3的核苷酸序列；用于对条形码DNA链进行实时荧光定量PCR检测的TaqMan荧光探针具有序列表中SEQ ID No：4的核苷酸序列。