[发明专利]一种用百草枯筛选转基因植物的方法

权利要求书

1.一种用于百草枯抗性的转基因植物的规模化筛选的双蛋白表达的表达盒，其依次包括第一启动子、目标基因、第一表达终止序列、第二启动子、潜在的百草枯抗性基因、和第二表达终止序列。

2.权利要求1所述的表达盒，其中潜在的百草枯抗性基因是百草枯抗性基因，优选是pqrK2，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

3.权利要求1所述的表达盒，其中目标基因是非绿颜色辨识基因，优选是荧光蛋白编码基因，更优选是红色荧光蛋白编码基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

4.权利要求1所述的表达盒，其中目标基因是非百草枯抗性的抗性基因，优选是草丁膦抗性，其核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示。

5.一种用于植物转化的载体，其中包含权利要求1-4至任一所述的表达盒，优选其中不含有潮霉素抗性基因。

6.权利要求5所述的载体，其是pCAMKT1300-Asred或pCAMKT1300-bar。

7.一种规模化筛选百草枯抗性的转基因植物的方法，其包括，使用包含权利要求3所述的表达盒的用于植物转化的载体通过农杆菌介导转化植物愈伤组织或植物体，将该植物愈伤组织或植物体培养于含有百草枯的环境中，然后挑选生长呈现非绿色的植物愈伤组织或植物体，其中，所述植物愈伤组织或植物体本身呈现绿色，优选所述环境中的百草枯是用喷洒或涂抹百草枯的方式引入环境的。

8.一种规模化筛选百草枯抗性和非百草枯抗性的转基因植物的方法，其包括，使用包含权利要求4所述的表达盒的用于植物转化的载体通过农杆菌介导转化植物愈伤组织或植物体，将所述植物愈伤组织或植物体培养于含有百草枯的环境中，然后挑选生长的植物愈伤组织或植物体，其中，优选所述环境中的百草枯是用喷洒或涂抹百草枯的方式引入环境的。

9.权利要求7或8的方法，其中，所述植物是双子叶植物或单子叶植物，其中双子叶植物优选是大豆、拟南芥、棉花或油菜，其中单子叶植物优选是水稻、小麦、玉米、高粱或谷子，优选所述植物是水稻。

10.权利要求7或8的方法，其中所述环境中百草枯的浓度为0.2～20uM，优选为1～5uM，最优选为1uM；和/或，培养植物愈伤组织或植物体的培养基是用于植物愈伤组织培养的培养基，优选不是用于植物分化和生根阶段的培养基，优选用于植物分化和生根阶段的培养基不含百草枯。