[发明专利]一种大豆遗传转化方法

权利要求书

1.一种大豆遗传转化方法，包括如下步骤：

1)用含有外源基因的重组农杆菌溶液侵染大豆的下胚轴，得到侵染后下胚轴；

2)将步骤1)得到的侵染后下胚轴进行共培养得到共培养后下胚轴；

3)将步骤2)得到的共培养后下胚轴进行芽诱导培养得到芽诱导后的下胚轴；

4)将步骤3)得到的芽诱导后的下胚轴进行筛选培养得到筛选后存活的下胚轴；

5)从步骤4)得到的筛选后存活的下胚轴中取下不定芽，将不定芽进行生根培养，得到转基因大豆幼苗。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述大豆的下胚轴为具有顶端分生组织的0.5cm-1cm长的下胚轴，所述大豆的下胚轴具体为具有顶端分生组织的0.5cm、0.8cm或1cm长的下胚轴；

所述受体大豆的下胚轴按照如下方法制备：大豆种子萌发5天-6天，去除种皮、子叶、顶芽，得到具有顶端分生组织的0.5cm-1cm长的下胚轴；

所述受体大豆的下胚轴具体按照如下方法制备：大豆种子萌发5天或6天，去除种皮、子叶、顶芽，得到具有顶端分生组织的0.5cm、0.8cm或1cm长的下胚轴。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：

步骤1)中，所述含有外源基因的重组农杆菌溶液为按照如下方法制备：所述含有外源基因的重组农杆菌重悬于液体共培养培养基中，调至OD值为0.3-0.8，25℃静置1h，得到重组农杆菌溶液；所述OD值具体为0.3、0.4、0.5、0.6或0.8；

所述液体共培养培养基按照如下方法制备：向1/2MS培养基中添加2-吗啡酸-乙磺酸、硫代硫酸钠、L-半胱氨酸、二硫苏糖醇、乙酰丁香酮、6-苄基腺嘌呤、硝酸银和蔗糖，得到所述液体共培养培养基，所述2-吗啡酸-乙磺酸在所述液体共培养培养基中的浓度为3.9g/L，所述硫代硫酸钠在所述液体共培养培养基中的浓度为0.2g/L，所述L-半胱氨酸在所述液体共培养培养基中的浓度为400mg/L，所述二硫苏糖醇在所述液体共培养培养基中的浓度为0.154g/L，所述乙酰丁香酮在所述液体共培养培养基中的浓度为200μmol/L，所述6-苄基腺嘌呤在所述液体共培养培养基中的浓度为4mg/L，所述硝酸银在所述液体共培养培养基中的浓度为5mg/L，所述蔗糖在所述液体共培养培养基中的浓度为30,000mg/L，所述液体共培养培养基的pH为5.6；

步骤2)中，所述共培养所用培养基按照如下方法制备：向所述液体共培养培养基中添加琼脂得到共培养所用培养基，所述琼脂在所述共培养所用培养基中的浓度为6,000mg/L，所述共培养所用培养基的pH为5.6；

步骤3)中，所述芽诱导培养所用培养基按照如下方法制备：向1/2MS培养基中添加6-苄基腺嘌呤、吲哚丁酸、蔗糖、羧苄青霉素、噻孢霉素、硝酸银和琼脂，得到所述芽诱导培养所用培养基，所述6-苄基腺嘌呤在所述芽诱导培养所用培养基中的浓度为4mg/L，所述吲哚丁酸在所述芽诱导培养所用培养基中的浓度为0.2mg/L，所述蔗糖在所述芽诱导培养所用培养基中的浓度为30,000mg/L，所述羧苄青霉素在所述芽诱导培养所用培养基中的浓度为300mg/L，所述噻孢霉素在所述芽诱导培养所用培养基中的浓度为300mg/L，所述硝酸银在所述芽诱导培养所用培养基中的浓度为5mg/L，所述琼脂在所述芽诱导培养所用培养基中的浓度为8,000mg/L，所述芽诱导培养所用培养基的pH为5.8；

步骤4)中，所述筛选培养所用培养基按照如下方法制备：向所述芽诱导培养所用培养基中添加卡那霉素，得到所述筛选培养所用培养基，所述卡那霉素在所述筛选培养所用培养基中的浓度为100mg/L，所述筛选培养所用培养基的pH为5.8；

步骤5)中，所述生根培养所用培养基按照如下方法制备：向1/2MS培养基中添加蔗糖、噻孢霉素、卡那霉素和琼脂，得到所述生根培养所用培养基，所述蔗糖在所述生根培养所用培养基中的浓度为20,000mg/L，所述噻孢霉素在所述生根培养所用培养基中的浓度为150mg/L，所述卡那霉素在所述生根培养所用培养基中的浓度为10mg/L，所述琼脂在所述生根培养所用培养基中的浓度为8,000mg/L，所述生根培养所用培养基的pH值为5.6。