[发明专利]人体血干细胞分离材料盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种医疗设备，确切的说是一种分离人体骨髓及脐带血干细胞的材料盒。

背景技术

干细胞治疗技术属于一种细胞生物疗法，对于患者身体没有明显的影响，采集外周血、骨髓血或脐带血，通过专用的干细胸分离液，提取、纯化后得到临床治疗所需要的干细胞，经过静脉点滴，肌肉注射或介入等方法将干细胞输入患者体内，利用干细胞具有自我复制和分化的能力来修复体内受损的细胞，达到治疗康复的目的。

本发明的目的就是提供一种分离人体骨髓及脐带血的干细胞分离专用材料盒，以实现血液成份单采，分离和清除病人循环血流中某些病理成分，回输其正常成份的一种有效迅速的辅助治疗手段和满足临床或科研的需要。

本发明的另一个目的就是提供了该分离材料盒的使用方法。

本发明的方案由材料盒盒体、干细胞保护液及离心管组成，所述的材料盒包括A型盒、B型盒，A型盒内装有250ml干细胞保护液2瓶，15ml离心管20支及15ml一次性医用空离心管20支，10ml移液管2支，每支离心管可分离5ml全血，每盒可分离100ml全血；B型盒内装有250ml干细胞保护液2瓶，50ml离心管10支及50ml一次性医用空离心管10支，20ml移液管2支，每支离心管可分离25ml全血，每盒可分离250ml全血。

所述A、B型盒的离心管内分别设有一次性医用密度介质溶液。15—50ml，所述密度介质为医用材料，化学性质稳定，无细胞毒性和组织毒性，密度介质完全化学惰性且无生物毒物。其中，密度介质密度1.073±0.001g/ml，密度介质渗透压290±15mosm，内毒素含量≤0.25EU/ml，所述的密度介质为聚蔗糖，商品名为Ficoll，为白色结晶性粉末，易溶于水，在中性和碱性溶液中稳定，PH小于3时水解破坏，被广泛地用作密度梯度离心的介质。

本发明结构简单，设计合理，使用快捷简便，无细胞毒性，干细胞获得率高，提取时间短，操作快，活性保存好，运输、保存使用方便。

下面结合附图作进一步详细说明。

附图说明

图1为细胞保护液瓶示意图；

图2为离心管示意图；

图3为移液管示意图；

图4为A型盒结构示意图；

图5为B型盒结构示意图。

具体实施方式

图1—4中示出的A型材料盒4内装有两瓶250ml干细胞保护液1，盒体的中部设有两支10ml移液管3，移液管的上下两侧装有二十支15ml离心管2及20支15ml一次性医用空离心管9。

图5中示出的B型材料盒5的盒体内装有两瓶250ml干细胞保护液1，盒体的中部设有两支20ml移液管7，移液管的上下两外侧装有十支50ml离心管6及10支50ml一次性医用空离心管8。

分离材料盒的使用方法，包括下列步骤：

1、检查外包装完整无破损，用75%酒精消毒后打开外包装，取出离心管，观察密度介质之上是否有游离的分离液，如有分离液，则用离心机分离，离心1分钟，离心机转速为2500转/分；

2、抗凝全血无需稀释，可直接缓慢加置密度介质之上，分离液不会与血液混合，如此可最大限度减少干细胞的分离时间，保留细胞活力；

3、20℃以下室温，用离心机离心18分钟，离心机转速为2500转/分；

4、吸取离心管中间絮状细胞层，移入另一支空无菌离心管中，该管无任何内容物，需提前加入3—6ml干细胞保护液，如此将所有离心管中间细胞层的细胞移至空离心管中，加入干细胞保护液至空离心管的最高刻度；

5、用离心机离心5分钟，弃上清液，沉淀细胞加入干细胞保护液反复清洗3遍；

6、用干细胞保护液或生理盐水稀释、收集所需细胞，密封，置于4℃冰箱中保鲜。

干细胞的质量控制：

1、干细胞数量：采用血细胞计数板或计数机对样本计数，临床治疗一定要满足治疗的干细胞数量方可应用；

2、干细胞存活率：采用4%台盼蓝染色法，不染色的细胞为活细胞，细胞存活率应在98%以上；

3、干细胞的鉴定方法：采用单克隆抗体免疫荧光法，用CD29、CD34、CD44、CD45等单克隆抗体，进行免疫荧光鉴定，干细胞纯度在98%以上；

4、干细胞的安全性检测：按照2005年中国药典三部附录中的ⅦA的方法检测细菌、支原体和真菌，结果为阴性；

5、干细胞的外源性病毒检测：细胞逆转录病毒检测阴性，不同传代培养细胞检查猴源Vero细胞和人源2BS细胞结果为正常形态，红细胞吸附试验结果阴性；

6、干细胞内毒素检测：依中华人民共和国药典2005年第三版（附录XⅡC），细胞内毒素含量<2EU/ml。