[发明专利]一种基于PCR-ELISA的结核分枝杆菌耐药基因检测方法

权利要求书

1.一种基于PCR-ELISA的结核分枝杆菌耐药基因检测方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）针对rpoB基因突变位点设计11个探针，且将所述探针点样于96微孔板；（2）每一个检测样本的DNA分3个反应管，每管中都加入rpoB-F和rpoB-R两种引物，每对引物中的下游引物5’端均带有地高辛标记，经PCR扩增出大量含有所述地高辛标记的结核分枝杆菌相应的基因片段产物；（3）将所述扩增产物与所述探针进行特异性杂交，杂交后带有所述地高辛标记的目标基因与所述探针结合在一起，洗去未结合的片段，通过ELISA反应，测量OD值得出结果。

2.根据权利要求1所述的一种基于PCR-ELISA的结核分枝杆菌耐药基因检测方法，其特征在于，步骤（1）中11个探针分别为：

MTC         5’-CGCTGTCGGGGTTGACCCA- 3’

RW1         5’-CAGCCAGCTGAGCCAATTCA-3’

RW2         5’-AATTCATGGACCAGAACAACCC-3’

RW3         5’-CCGCTGTCGGGGTTGACC-3’

RW4         5’-GTTGACCCACAAGCGCCGA-3’

RW5         5’-GACTGTCGGCGCTGGGGC- 3’

RM2         5’-AATTCATGGTCCAGAACAACCC -3’

RM4a        5’-GGTTGACCTACAAGCGCCGA- 3’

RM4b        5’-GTTGACCGACAAGCGCCGA- 3’

RM5a        5’-GACTGTTGGCGCTGGGGCC- 3’

RM5b        5’-GACTGTGGGCGCTGGGGCC-3’。

3.根据权利要求1所述的一种基于PCR-ELISA的结核分枝杆菌耐药基因检测方法，其特征在于，步骤（2）中两种引物分别为：

rpoB-F    5’-GTGGTCGCCGCGATCAAG-3’

rpoB-R    5’-CACGTCGCGGACCTCCAG-3’。