[发明专利]一种注射剂中5-羟甲基糠醛含量的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药注射剂的检测方法，具体涉及一种注射剂中5-羟甲基糠醛含量的测定方法。

背景技术

5-羟甲基糠醛(又名5-羟甲基-2-糠醛、羟甲基糠醛、5-羟甲基呋喃甲醛或5-羟甲基-2-呋喃甲醛)，英文名5-hydroxymethyl-2-furfural、5-hydroxymethyl-furfural或5-HMF，是一种化学物质。

注射剂中特别是含糖的注射剂往往含有杂质5-羟甲基糠醛。一些中药注射剂中因含有糖类物质也可能存在杂质5-羟甲基糠醛，其原因在于中药提取物中含量大量的糖类物质，高温下果糖、葡萄糖及其它糖类物质均易脱水，进一步生成5-羟甲基糠醛及聚合物，可能给机体带来过敏、刺激性。其形成过程中受多种因素的影响，在酸性条件下，加热的时间和温度是首要因素。不论是中药的炮制过程还是注射液的高温灭菌过程均能使5-HMF的含量呈规律性变化，有时其含量的增加与灭菌温度、时间成正比。另外，高温状态下，存在溶液的电解质价数越高，分解产生的5-HMF量越多^[3]。目前5-HMF研究主要集中在检测牛乳、果汁、蜂蜜、酒类和药物中5-HMF的含量，其含量的多少是反映这些物品内在质量的重要指标。

有研究利用结肠致癌剂造模的45F344雄性大鼠进行实验，结果发现，对糖进行加热后如能产生含量为1％的5-HMF，就有可能引发并促进结肠小囊异常生长(ACF)^[4]。另有研究显示5-HMF还可产生一定程度的基因毒性，推测其机制可能为5-HMF在体内经过硫化和氯化的过程而产生的致突变作用^[5]。此外，5-HMF对人体横纹肌和内脏有毒副作用。5-HMF由静脉入血后会产生副作用^[6]。故在中国药典^[7]、中国医院制剂规范^[8]中分别限定了葡萄糖、果糖注射液中5-HMF的含量。有关5-HMF的药理作用一直以来存有争议，有报道5-HMF有一定程度的毒副作用，但近年来研究表明其还具有抗氧化、改善血液流变学等对人体有利的作用。

5-HMF的检测方法和含量测定方法的研究也较多，其在284nm处有最大吸收。UV-可见分光光度法^[9]是较为普遍的测定方法。近年来HPLC的应用克服了5-HMF和其他成分在同一波长处(284nm)有吸收的问题，从而能够更准确的测定其含量和控制注射液的质量。

由于中药注射液和含糖的注射剂是临床常用的制剂，其质量的优劣直接关系到人民的身体健康，因此药典中对其相关杂质含量作出了明确规定。如5-羟甲基糠醛(5HMF)的含量，一直以来，生产中对5-HMF的控制或工艺上掌握不好，严重超标。因此控制注射剂中杂质5-羟甲基糠醛的含量是一项重要课题。

发明内容

本发明提供了一种注射剂中5-羟甲基糠醛含量的测定方法，该方法简捷、快速、准确，可以适用于任何可能含有5-羟甲基糠醛的注射剂，包括注射液，注射乳剂和粉末注射剂等，例如生脉注射液、葡萄糖大输液、注射用益气复脉冻干制剂等，特别适合于注射用益气复脉冻干制剂。

本发明的注射剂中5-羟甲基糠醛含量测定方法，经过以下步骤：

(1)注射剂预处理配成样品溶液；

(2)5-羟甲基糠醛对照品溶液的配制；

(3)采用高效液相色谱法对样品和对照品进行测定；

(4)计算样品中5-羟甲基糠醛的含量。

其中所述预处理包括注射剂配成溶液过大孔吸附树脂，用醇洗脱，得到洗脱溶液，所述的大孔吸附树脂优选聚苯乙烯类树脂，更优选ProElut^TMSPE、Cleanert^TMSPE、Strata^TM-X或AB-8树脂。所述醇选自乙醇和甲醇，优选40％甲醇。

优选的预处理方法如下；取注射剂(若为粉末剂则用水溶解，若为液体制剂则直接上样)，上预先处理好的大孔吸附树脂，用少量水冲洗，弃取流出液；再以甲醇洗脱，洗脱液收集于10ml量瓶中至刻度后，混匀后用0.45um滤膜过滤，取滤液供分析用。

本发明所述的方法，用高效液相色谱检测时，对照品上样时优选用甲醇作溶剂。

本发明所述的方法，优选用两瓶注射用益气复脉冻干制剂作为样品。

本发明所述的方法，大孔吸附树脂柱的参数优选为内径6～8mm，柱高5cm，速度为1ml/ml。