[发明专利]毕赤酵母菌及其发酵培养方法、菌剂及其生产方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一株毕赤酵母菌及其发酵培养方法和菌剂及菌剂的生产方法，还涉及毕赤酵母菌的应用。

背景技术

植物根际或自身中存在着一些有益细菌，它们可以通过直接或间接的方式对由病原菌引起的植物病害起到防治作用，这些能够防治病害、增加作物产量的微生物统称为生防菌(biocontrol bacteria)。生防菌对土壤中的有害病原微生物以及非寄生性根际有害微生物具有生物防治作用。生防菌具有拮抗效果好、不产生毒素、可与化学杀菌剂共同使用等优点而成为病害防治研究的热点。

目前化学杀菌剂处理和简易贮藏仍是我国控制果蔬采后损失的主要方法。但长期使用杀菌剂，容易导致病原菌抗药性的产生，用药量不断加大，造成果蔬上农药残留量增加，直接威胁人类健康，这已成为当今公众最关注的食品安全问题之一。因而，寻求一种能代替化学农药的安全、无毒、经济、有效的保鲜新技术、新方法已成为当务之急。果蔬采后生物防治技术是利用微生物之间的拮抗作用，选择对农产品不造成危害的微生物或产物来抑制引起采后腐烂的病原微生物的生长，从而减少采后损失，近年来被证明是最有效、最具发展潜力的一种保鲜方法。酵母菌作为果蔬生物防治拮抗菌的最大优点是它能在较干燥的果蔬表面生存，可迅速利用营养进行繁殖，受杀虫剂的影响小。且酵母菌不产生抗生素，能够避免病原菌对抗生素产生抗性而降低生物防治的抑病效果。

发明内容

本发明的目的是提供一株具有防治病害作用的酵母菌及其发酵培养方法，还提供以该酵母菌为活性成分的菌剂及其生产方法和应用。

一种毕赤酵母菌，保藏编号为：CGMCC No.4273。本发明所提供的毕赤酵母(Pichia pastoris)CH01细胞形态较大，直径16～22μm，呈圆形或卵圆形，细胞为多端芽殖菌株。菌落圆形，较小，湿润，光滑，乳白色，不透明，边缘整齐，质地均匀，中部不隆起。子囊为圆形或长椭圆形，每一个子囊内含3个子囊孢子，子囊孢子为圆形。不产生掷孢子。产生假菌丝，呈丛枝状。其生理生化特性为：葡萄糖、蔗糖、乳糖、半乳糖均能发酵，不能同化可溶性淀粉，能同化麦芽糖、水解乳糖和D-木糖。同化氮源NaNO₃、Ca(NO₃)₂、KNO₃。不能同化肌醇和山梨醇，能同化甘露醇，乙醇；产酯产类淀粉；不能使牛奶胨化，不能分解尿素，但能通过耐高渗透压测试。

本发明还提供一种所述毕赤酵母菌的发酵培养方法，包括以下步骤：1)将经活化的毕赤酵母菌接种到该菌常用发酵培养液中，培养得到种子液；2)将步骤1)制备的种子液接种到该菌专用发酵培养基中，通气培养，得到毕赤酵母菌菌液；

步骤1)中毕赤酵母菌常用发酵培养液配方：每1000mL水中马铃薯200g，葡萄糖20g，pH 6.0。

步骤2)中毕赤酵母菌专用发酵培养基配方为：每1000ml水中含玉米粉5g，豆饼粉5g，花生粉5g，KH₂PO₄ 2.5g，MgSO₄ 0.25g，CaCl₂ 0.25g，尿素0.24g，红糖5g，pH 5.5。

所述的发酵培养方法，所述步骤1)中对所述毕赤酵母菌菌株进行活化的方法为：将该菌株接种到PDA培养基中，在20-30℃下培养48h；所述PDA培养基的配方为：每1000ml水中含马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15g，pH6.0。

所述的发酵培养方法，所述毕赤酵母菌专用发酵培养基中还添加有质量百分比浓度为0.28％的聚丙烯聚乙烯甘油醚。

所述的发酵培养方法，所述步骤1)中培养条件为：在25℃、pH 6.0、150r/min下振荡培养36-48h。

所述的发酵培养方法，步骤2)中的接种比例为2％。

所述的发酵培养方法，所述步骤2)的通气培养是在25℃，pH 5.5的条件下，装液量为20％，摇床转速200r/min，培养时间为72-96h。

本发明还提供一种以毕赤酵母菌为活性成分的菌剂。