[发明专利]N-(N-苯甲酰基-苯丙氨酰基)-苯丙氨酸二肽衍生物的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，涉及N-(N-苯甲酰基-苯丙氨酰基)-苯丙氨酸二肽衍生物的检测方法，尤其是N-(N-苯甲酰基-苯丙氨酰基)-苯丙氨酸二肽衍生物及其相关制剂的光学异构体的检测方法。

背景技术

在中国专利CN1194676C中，公开了一种从苗族药马蹄金(Dichondra repens Forst.)中分离得到的具有抗乙肝病毒活性的单体N-(N-苯甲酰基-苯丙氨酰基)-O-乙酰基-L-苯丙氨醇，而中国专利CN100480234C中公开了以上述单体为母体进行结构修饰和改造设计合成的一系列结构新颖的N-(N-苯甲酰基-苯丙氨酰基)-苯丙氨酸二肽衍生物，已证实部分衍生物具有抑制乙肝病毒(HBV)的活性，且毒副作用低，作为一类非核苷类抗病毒药物，可用于制备治疗病毒性感染药物，尤其是用于制备抗乙肝病毒和抗人免疫缺陷病毒的药物。

鉴于N-(N-苯甲酰基-苯丙氨酰基)-苯丙氨酸二肽衍生物是一类新化合物，由于其含有两个手性中心，需要建立一种能够同时检测其各种构型异构体且分离度符合标准的方法。

发明内容

因此，本发明的目的是提供一种N-(N-苯甲酰基-苯丙氨酰基)-苯丙氨酸二肽衍生物的光学异构体的检测方法。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的。本发明提供的N-(N-苯甲酰基-苯丙氨酰基)-苯丙氨酸二肽衍生物的光学异构体的检测方法，所述方法为高效液相色谱法，其中的色谱条件如下：色谱柱为固定相为表面涂敷或键合手性多聚物(例如，直链淀粉或纤维素衍生物)的球形硅胶为填料的手性色谱柱，检测波长为200-260nm，流动相为烷烃/醇类，流速为0.4-1.5ml/min。此外，理论塔板数按N-(N-苯甲酰基-苯丙氨酰基)-苯丙氨酸二肽衍生物计算不低于5000。

优选地，所述色谱柱选自CHIRALPAKIA或CHIRALPAKAD-H。

优选地，所述检测波长为226nm。

优选地，所述流动相中烷烃与醇类的体积比为50-95∶50-5，优选为80-90∶20-10。

优选地，所述流动相中烷烃选自正己烷、正戊烷、正庚烷和正辛烷中的一种或几种；和/或优选地，所述醇类选自乙醇、异丙醇、正丁醇中的一种或几种；更优选地，所述烷烃为正己烷，和/或所述醇类为异丙醇。

优选地，所述流动相中还包括作为添加剂的酸性或碱性溶剂，用于改善色谱峰峰形与分离度，酸性和碱性分别适用于不同结构的化合物。

优选地，所述添加剂选自二乙胺、三乙胺、甲酸、乙酸和三氟乙酸中的一种或几种，优选为二乙胺。

优选地，所述流动相中烷烃、醇类和添加剂三者的体积比为50-95∶50-5∶0-0.5；优选为80-90∶20-10∶0-0.5；更优选为82∶18∶0.3或者85∶15∶0.1。

优选地，所述色谱柱的柱温为20～60℃，优选为20～30℃。

优选地，所述N-(N-苯甲酰基-苯丙氨酰基)-苯丙氨酸二肽衍生物为式(I)化合物或其药学上可接受的盐或水合物：

式(I)

其光学异构体包括(2S，2’S)、(2S，2’R)、(2R，2’S)或(2R，2’R)。

此外，本发明还提供了上述方法在检测N-(N-苯甲酰基-苯丙氨酰基)-苯丙氨酸二肽衍生物或包含N-(N-苯甲酰基-苯丙氨酰基)-苯丙氨酸二肽衍生物的制剂中的应用。优选地，所述制剂包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、控释或缓释制剂。

综上所述，本发明提供的方法采用高效液相色谱-手性色谱柱法实现了N-(N-苯甲酰基-苯丙氨酰基)-苯丙氨酸二肽衍生物的光学异构体的快速准确测定，并且分离度均大于1.50，符合标准，为此类化合物的研究开发及质量检测奠定了基础，具有现实意义。

可见，本发明提供的方法具有较高的灵敏度和专属性，操作简捷的优点，可快速准确的检测出N-(N-苯甲酰基-苯丙氨酰基)-苯丙氨酸二肽衍生物的光学异构体，可用于N-(N-苯甲酰基-苯丙氨酰基)-苯丙氨酸二肽衍生物的质量控制。

附图说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：

图1为实施例1中采用本发明的方法检测得到的色谱图。

图2为实施例2中采用本发明的方法检测得到的色谱图。

图3为实施例4中得到的线性关系图。

具体实施方式