[发明专利]新霉素菌种选育快速筛选方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种新霉素菌种选育快速筛选方法，尤其涉及一种将新霉素优良菌种快速鉴别出来的方法。

背景技术

新霉素菌种筛选是提高菌种质量，稳定发酵水平的关键环节。长期以来，新霉素菌种选育一直采用抗生素微生物检定法来测定不同单菌落的生产能力，从中选择生产能力高的菌株，淘汰生产能力低下的菌株。由于菌种选育要经过初筛和复筛两个阶段，筛选的单菌落众多，一般在150-200，加之抗生素微生物检定法操作繁琐，测定时间约需20小时，且每次测定数量有限，故要分数批进行测定，这不但大大降低了菌种筛选效率，还因不同条件、不同操作人等因素的变化，增加了生物检定法测定的误差，降低了选育优良菌种的准确性。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种新霉素菌种选育快速筛选方法,该方法能够缩短菌种选育的周期，提高菌种筛选效率和选育优良菌种的准确性，为新霉素发酵生产提供优良的菌种，从而提高和稳定新霉素发酵生产水平。

本发明的目的是这样实现的：一种新霉素菌种选育快速筛选方法，包括以下步骤：

（1）接种发酵瓶：在无菌室内采用挖块接种法将新霉素单菌落斜面接于发酵瓶，将发酵瓶放入摇床上振摇，摇床转速250转/分；温度35±2度；培养时间135-140小时，完成发酵瓶接种；

（2）发酵液过滤：将发酵到终点的发酵瓶进行过滤，取其过滤液；

（3）平板的培养基的准备：将生物检定培养基预热融化，在无菌室内倒入平板内，待培养基凝固后，再倒入内含敏感菌的检定培养基；

（4）直接点样：将多个用滤纸制作成圆形纸片放置于平板培养基上，用进样器吸取发酵液的过滤液直接点在圆形纸片上，所有样品点完后，将平板培养基放入培养箱中进行培养，培养时间14-16小时，培养温度36-38度；

（5）抑菌圈的测量：将培养24小时的平板从培养箱中取出，对每个抑菌圈进行测量，根据菌种选育确定的数量，优先选择抑菌圈大的菌株进行生物效价确认，完成新霉素菌种选育快速筛选。

控制培养基厚度在2-3mm之间。

控制检定培养基的厚度在2-3mm之间。 

本发明提供的新霉素菌种选育快速筛选方法，由于发明了菌种选育中的快速简化的筛选方法，从而缩短菌种选育的周期，以前菌种选育周期要用5周时间，现在仅用一周时间，菌种筛选效率提高的80%；本发明提高菌种筛选效率和选育优良菌种的准确性，从而为新霉素发酵生产提供优良的菌种，为提高和稳定发酵生产水平提供了可靠保证。

具体实施方式

实施例：

（1）接种发酵瓶：在无菌室内采用挖块接种法将新霉素单菌落斜面接于发酵瓶，将发酵瓶放入摇床上振摇，摇床转速250转/分；温度35±2度；培养时间135-140小时，完成发酵瓶接种；

（2）滤液的制备：将发酵到终点的发酵液100ml进行过滤，用滤纸过滤,获取过滤液；

（3）平板的准备：用不锈钢薄板制作35×25×4cm尺寸的平板（带盖），将生物检定培养基预热融化，在无菌室内倒入平板内，倒入量以培养基厚度控制在2-3mm为宜,待培养基凝固后，再倒入内金黄色葡萄球菌作含敏感菌的检定培养基，倒入量以培养基厚度控制在2-3mm为宜；

（4）直接点样：用滤纸制作成直径为5mm的圆形纸片，将纸片按适当距离放置于平板培养基上，后用5微升进样器吸取发酵液的过滤液直接点在圆形纸片上，样品点完后，将平板培养基放入培养箱中进行培养，培养时间14－16小时，培养温度36－38度。

（5）抑菌圈的测量：将培养后的平板从培养箱中取出，用游标卡尺对每一个抑菌圈进行测量，根据菌种选育确定的数量，优先选择抑菌圈大的菌株进行下一步的生物效价确认。

实施例试验数据一：

试验数据一中采用的是两个效价差别大的样进行对比，是在不同批次，不同发酵时间的完成的取样，从表中数据显示，效价高的其抑菌圈直径大，效价低的其抑菌圈直径小。

实施例试验数据二：

从试验数据二可以看到不同效价的样，其效价高的抑菌圈直径大，效价低的抑菌圈直径小。规律性较强，通过这一规律，可完成新霉素菌种选育快速筛选。