[发明专利]一种用于猪、人和蚊子中乙型脑炎病毒抗原检测的ELISA试剂盒及应用

权利要求书

1.一种乙型脑炎病毒E蛋白单克隆抗体，其特征在于，它是由保藏号为CCTCC NO：C2010114的杂交瘤细胞株JEV/4D1C所分泌的。

2.权利要求1所述的杂交瘤细胞株JEV/4D1C，保藏在中国典型培养物保藏中心，其保藏号为CCTCC NO：C2010114。

3.包含权利要求1所述的单克隆抗体和兔源多克隆抗体的乙型脑炎双抗体夹心ELISA抗原检测试剂盒。

4.一种适用于猪、人、蚊子中乙型脑炎病毒抗原检测的双抗体夹心ELISA试剂盒，其特征在于，该试剂盒由下列部分构成：保藏号为CCTCC NO：C2010114的单克隆抗体包被的酶标板和乙型脑炎兔源多克隆抗体构成的双夹心抗体，辣根过氧化酶标记的羊抗兔酶标抗体，标准阳性对照乙型脑炎E蛋白，标准阴性对照大肠杆菌BL-21菌体蛋白，洗涤液，样品稀释液，底物液A、底物液B和终止液，其中所述的洗涤液，样品稀释液，底物液A、底物液B和终止液的组分及配比如下：

洗涤液(10×浓缩)：NaCl 80.0g，KH₂PO₄ 2.7g，Na₂HPO₄·12H₂O 14.2g，KCl 2.0g，Tween205mL，，加双蒸水至1000mL；

样品稀释液：NaCl 0.8g，KH₂PO₄ 0.27g，Na₂HPO₄·12H₂O 1.42g，KCl 0.2g，BSA 10g，加双蒸水至1000mL；

底物液A：3，3’，5’，5-四甲基联苯二胺200mg，无水乙醇100mL，加双蒸水至1000mL；；

底物液B：Na₂HPO₄ 14.6g，柠檬酸9.3g，0.75％浓度的过氧化氢尿素6.4mL，加双蒸水至1000mL，调节pH至5.0～5.4；

终止液：2mol/L硫酸溶液。

5.一种适用于猪、人、蚊子等临床样品中乙型脑炎病毒抗原检测的双抗体夹心ELISA方法，包括制备保藏号为CCTCC NO：C2010114的单克隆抗体包被的酶标板，乙型脑炎兔源多克隆抗体，辣根过氧化酶标记的羊抗兔酶标抗体，标准阳性对照乙型脑炎E蛋白，标准阴性 对照BL-21菌体蛋白，洗涤液，样品稀释液，底物液A和底物液B和终止液，其步骤包括：

(1)以乙型脑炎E蛋白作为免疫原；

(2)用步骤(1)的免疫原制备得到保藏号为CCTCC NO：C2010114的单克隆抗体；

(3)用步骤(2)所述的单克隆抗体包被酶标板作为一抗；

(4)将待检测样品用样品稀释液按体积比为1∶10稀释得到待检测物；

(5)用乙型脑炎弱毒疫苗免疫兔获得兔源多克隆抗体作为二抗；

(6)对步骤(4)所述的待检测物进行检测，于酶标仪上读取630纳米处的吸光光度值；其中洗涤液，样品稀释液，底物液A和底物液B和终止液的组分及配比如下：

洗涤液(10×浓缩)：NaCl 80.0g，KH₂PO₄ 2.7g，Na₂HPO₄·12H₂O 14.2g，KCl 2.0g，Tween205mL，，加双蒸水至1000mL；

样品稀释液：NaCl 0.8g，KH₂PO₄ 0.27g，Na₂HPO₄·12H₂O 1.42g，KCl 0.2g，BSA 10g，加双蒸水至1000mL；

底物液A：3，3’，5’，5-四甲基联苯二胺200mg，无水乙醇100mL，加双蒸水至1000mL；；

底物液B：Na₂HPO₄ 14.6g，柠檬酸9.3g，0.75％浓度的过氧化氢尿素6.4mL，加双蒸水至1000mL，调节pH至5.0～5.4；

终止液：2mol/L硫酸溶液。

6.权利要求1所述的单克隆抗体在制备乙型脑炎双抗体夹心ELISA抗原检测试剂盒中的应用。

7.权利要求3或4所述的试剂盒在乙型脑炎抗原体外检测中的应用。