[发明专利]一种全程定量检测C反应蛋白的免疫层析试纸条及其制备方法

权利要求书

1.一种全程定量检测C反应蛋白的免疫层析试纸条，所述试纸条由样品垫(1)、标记垫(2)、包被膜(3)、吸水纸(4)顺次搭接粘贴在底板上构成，其特征在于，所述标记垫(2)上包被有荧光胶乳微粒标记的CRP单克隆抗体和荧光胶乳微粒标记的兔IgG；所述包被膜(3)包括检测区(5)和质控区(6)，所述检测区(5)包被有与所述荧光胶乳微粒标记的CRP单克隆抗体处于不同表位的另一种CRP单克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的全程定量检测C反应蛋白的免疫层析试纸条，其特征在于，所述荧光胶乳微粒标记的CRP单克隆抗体的浓度为0.5～2mg/ml，在试纸条上的用量为0.4～1.0μg/cm²。

3.根据权利要求1所述的全程定量检测C反应蛋白的免疫层析试纸条，其特征在于，所述兔IgG的浓度为0.5～2mg/ml，在试纸条上的用量为0.25-0.45μg/cm²。

4.根据权利要求1所述的全程定量检测C反应蛋白的免疫层析试纸条，其特征在于，所述检测区包被的CRP单克隆抗体的浓度为0.5～2mg/ml，用量按膜包被液量为20μl/27-35cm。

5.根据权利要求1所述的全程定量检测C反应蛋白的免疫层析试纸条，其特征在于，所述荧光胶乳微粒的直径为0.1μm～1μm。

6.根据权利要求1所述的全程定量检测C反应蛋白的免疫层析试纸条，其特征在于，所述荧光胶乳微粒受激发后发射的波长为180nm～800nm。

7.根据权利要求1所述的全程定量检测C反应蛋白的免疫层析试纸条，其特征在于，所述包被膜上的质控区包括包被抗人IgG的C1线和包被抗兔IgG的C2线。

8.根据权利要求7所述的全程定量检测C反应蛋白的免疫层析试纸条，其特征在于，所述抗人IgG的浓度为0.5～1mg/ml，抗兔IgG的浓度为0.5～2mg/ml，抗人IgG和抗兔IgG的用量按膜包被液量均为20μl/27-35cm。

9.一种权利要求1所述的全程定量检测C反应蛋白的免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

A.荧光胶乳的共价活化

超声波处理荧光胶乳微球体30秒后，调节荧光胶乳微球体浓度为1.0×10¹²～1.0×10¹³/ml，10000～15000xg离心5～15分钟，沉淀物用蒸馏水或50～200mM pH6.0～7.0磷酸钠溶液溶解，并超声波200W处理30秒；先加入10～100μl的20～100mg/ml碳二亚胺，混匀，再加入10～100μl的20～100mg/mlN-羟基硫代琥珀酰亚胺，混匀；室温孵育20-40分钟后10000～15000xg、离心5～15分钟，沉淀用20～100mM、pH5.0～6.0的柠檬酸缓冲液溶解，放置于2～8℃条件下备用；

B.荧光胶乳微粒标记蛋白的制备

将上述活化后的荧光胶乳超声波200W处理30秒后，按照1μg～125μg蛋白/100μl荧光胶乳的比例分别加入CRP单克隆抗体和兔IgG，混匀后室温搅拌反应1.5-3小时，离心洗涤2-4次，每次10000～15000xg、离心5～15分钟，沉淀用PBS-TBN溶解并超声波100W处理30秒，用PBS-TBN恢复离心前体积调节至浓度为0.5～2mg/ml，按0.4～1.0μg/cm²的用量涂覆在标记垫上；

C.包被膜的制备

分别将另一种CRP单克隆抗体和抗兔IgG用包被缓冲液调节至浓度为0.5～2mg/ml，将抗人IgG用包被缓冲液调节至浓度为0.5～1mg/ml，将CRP单克隆抗体喷到包被膜(3)上的检测区，将抗兔IgG和抗人IgG喷到包被膜(3)上的质控区，所述CRP单克隆抗体、抗兔IgG和抗人IgG的用量按膜包被液量均为20μl/27-35cm，检测区和质控区间隔3-8mm，在湿度＜30％的室温下凉干12-24小时，封袋，备用；

D.在底衬上顺次相互搭接地粘贴样品垫(1)、标记垫(2)、包被膜(3)和吸水纸(4)得到试纸板，按照要求切割成适当宽度的试纸条。