[发明专利]一种全程定量检测C反应蛋白的免疫层析试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医学检验领域，尤其涉及一种全程定量检测C反应蛋白的免疫层析试纸条及其制备方法。

背景技术

C反应蛋白(C-reactive protein，CRP)，1930年Tillet和Francis在急性大叶性肺炎患者血清中发现能在钙离子存在时与肺炎球菌C多糖起沉淀反应而得名，是人类重要的急性期反应蛋白，急性期浓度可升高上千倍，循环中的CRP半衰期为19小时。

C反应蛋白可以和肺炎链球菌的荚膜C多糖结合，是机体受到微生物入侵或组织损伤等刺激时肝细胞合成时的急性时相蛋白，当发生炎症疾病或者组织发生溃烂或者坏死时，会在血液中急速升高，但随着组织结构和功能的复原，其含量也恢复正常。因此，高浓度的CRP测定在诊断细菌感染、癌症等疾病的严重性、进程、愈后以及治疗效果方面具有广泛的临床意义。

CRP作为心血管疾病最强的危险指标，其水平可以预测将来心肌梗塞及中风的危险性。健康人CRP参考范围基本为0.58-1.13mg/L。CRP含量大于2.1mg/L的人，比较CRP含量小于等于1mg/L者，将来发生心肌梗塞的危险性为后者的2.9倍，发生缺血性中风的危险性为后者的1.9倍，发生外周动脉血管性疾病的危险性为后者的4.1倍。CRP与血脂的联合测定，较其他危险因子更能预示发生心、脑血管疾病的危险性，是目前进行冠心病危险评估的最佳模型。最近研究表明，低浓度的CRP测定，还可以作为新生儿感染，局部感染等疾病，以及相关疾病的诊断标志物。

C反应蛋白是细菌感染和严重组织损伤的一项诊断指标，其升高可见于：

1.组织损伤、感染、肿瘤、心肌梗塞及一系列急慢性炎症性疾病，如风湿性关节炎、全身性血管炎、多肌痛风湿病等。

2.术后感染及并发症的指标：手术后病人CRP升高，术后7-10天CRP水平应下降，如CRP不降低或再次升高，提示可能并发感染或血栓栓塞。

3.可作为细菌性感染和病毒性感染的鉴别诊断：大多数细菌性感染会引起患者血清CRP升高，而病毒性感染则多数不升高。

4.近年来有研究指出用超敏乳胶增强法测CRP，提高测定的敏感性，可用于冠心病和心梗危险性的预测。

传统的检测CRP的几种方法：在胶乳凝集实验法的灵敏度为1.0mg/L，是半定量的方法，现在已经较少使用；免疫比浊法的灵敏度为5.0mg/L，检测范围为5～230mg/L，但是需要自动生化分析仪和自动化免疫测定仪等大型仪器，存在操作复杂耗时长，所需要标本量大等问题。化学发光法检测存在时间检测时间长，一般需要耗时90mins左右，需要在实验室专业操作。放射免疫测定法的灵敏度在3μg/L，但是存在同位素污染等问题。

全程定量检测C反应蛋白是指其测定方法比传统方法更敏感，测定范围更宽广。临床常规测定C反应蛋白的方法为免疫比浊法，测定范围一般为3～200mg/L，但其灵敏度相对较低，无法准确测定3mg/L以下水平的C反应蛋白含量，不能作为心、脑血管疾病的危险指标，预测心、脑血管疾病发生的危险性。临床高敏C反应蛋白的测定范围又相对较窄，无法准确测定高浓度水平下CRP的含量，不能用于感染性疾病的诊断或者疗效的观察。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术中存在的不足，提供一种既可以测定低水平CRP含量，且灵敏度高、稳定性强、测定准确的全程C反应蛋白检测试纸条。

为实现上述目的，本发明采取了以下技术方案：

一种全程定量检测C反应蛋白的免疫层析试纸条，由样品垫、标记垫、包被膜、吸水纸顺次搭接粘贴在底板上构成，所述标记垫上包含有荧光胶乳微粒标记的CRP单克隆抗体和荧光胶乳微粒标记的兔IgG；所述包被膜包括检测区和质控区，所述检测区包被有与所述荧光胶乳微粒标记的CRP单克隆抗体处于不同表位的另一种CRP单克隆抗体。

优选地，所述荧光胶乳微粒标记的CRP单克隆抗体的浓度为0.5～2mg/ml，在试纸条上的用量为0.4～1.0μg/cm²。所述兔IgG的浓度为0.5～2mg/ml，在试纸条上的用量为0.25-0.45μg/cm²。所述检测区包被的CRP单克隆抗体的浓度为0.5～2mg/ml，用量按膜包被液量为20μl/27-35cm。

优选地，所述荧光胶乳微粒的直径为0.1μm～1μm。所述荧光胶乳微粒受激发后发射的波长为180nm～800nm。