[发明专利]融合表达重组制备T4核酸内切酶V

权利要求书

1.一种在大肠杆菌中可溶性融合表达和重组制备T4核酸内切酶V(T4N5)的方法，其特征在于：融合表达方式为TRX-Linker-T4N5，融合蛋白为硫氧还原蛋白(TRX)，TRX位于氨基端，T4N5位于羧基端，中间由连接肽Linker相连。

2.权利要求1中所述T4N5氨基酸序列为SEQ ID NO：1。

3.权利要求1中所述的连接肽(Linker)中含有专一性的蛋白酶酶切位点。

4.权利要求3中所述蛋白酶酶切位点为肠激酶酶切位点DDDDK，或凝血酶酶切位点LVPRGS，或烟草蚀纹病毒蛋白酶酶切位点ENLYFQG。

5.权利要求1、3中所述连接肽Linker中含有位于蛋白酶酶切位点前的组氨酸标签序列，该序列由4-10个组氨酸串联。

6.权利要求2中所述序列SEQ ID NO：1的N端第一位氨基酸Met可由Gly取代，其专一性蛋白酶酶切位点优选烟草蚀纹病毒蛋白酶酶切位点。

7.权利要求2中所述序列SEQ ID NO：1的N端第一位和第二位氨基酸Met Thr可由Gly Ser取代，其专一性蛋白酶酶切位点优选用凝血酶酶切位点。

8.权利要求1中所述的重组制备T4N5的方法包括：

(1)构建含编码TRX-Linker-T4N5的cDNA序列的重组质粒；

(2)重组质粒转化大肠杆菌，获得可溶性表达TRX-Linker-T4N5的融合蛋白的菌株，优选大肠杆菌菌株Origami DE3；

(3)表达菌株经发酵培养和诱导，可溶性表达TRX-Linker-T4N5；

(4)表达菌体经破菌、Ni亲合层析、蛋白酶切、反相层析、离子层析等步骤，获得高纯度的重组T4N5蛋白。

9.权利要求8所述的重组制备的T4N5具有更高的DNA修复活性，可用于DNA修复的药物、工具酶和护肤品的光修复成分。