[发明专利]相思子毒素A链突变体的构建及作为候选疫苗抗原

说明书

技术领域

本发明涉及一种相思子毒素A链突变体的构建及作为候选疫苗抗原，尤其涉及一种与相思子毒素疫苗相关蛋白及其编码基因与应用。

背景技术

随着生物技术的快速发展和生物毒素的开发利用，毒素在大规模杀伤性武器中的重要性已凸现出来，生物毒素及其生物恐怖的威胁与日俱增。相思子毒素是由A、B链组成，A链为效应链，具有RNA N-糖苷酶活性，B链为结合链，介导A链进入细胞内发挥毒性作用。不同产地的相思子含有在一级结构上稍有差异的相思子毒素，表现为其毒性大小有差异，文献报道的相思子毒素小鼠腹腔LD₅₀介于4-20μg/kg之间。生产原料相思籽来源广泛，容易获得，在许多公开的专业刊物和互联网上又可轻易得到如何提取制备相思子毒素的详细资料，所以，相思子毒素的恐怖威胁不容忽视。针对相思子毒素中毒，目前尚无预防疫苗、特异性抗毒素和解毒药。通过分析现有的研究进展和成果，美军的生防专家认为，疫苗研究是对抗其中毒的有效预防手段。因此，开展相思子毒素疫苗的研究，具有十分重要的军事和社会意义。

我国学者对相思子毒素生物战剂的侦检和医学防护等研究领域刚刚起步，针对相思子毒素的恐怖袭击尚无配套诊断试剂和有效免疫治疗及防护手段，因此迫切需要建立和发展具有自主知识产权的检测和防护用品。为了防止敌对势力和恐怖组织使用相思子毒素等生物战剂的袭击，应尽快建立和完善相思子毒素等生物战剂的侦检和医学防护系统，保证及时采取应急措施和对策，将生物恐怖袭击造成的破坏降低到最低限度。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种与相思子毒素疫苗相关蛋白及其编码基因。

本发明提供的蛋白质，命名为mATA，是如下1)或2)中任一所述的蛋白质：

1)由序列表中的序列2的氨基酸残基序列组成的蛋白质；

2)将序列表中的序列2氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由1)衍生的蛋白质。

上述序列表中的序列2由251个氨基酸残基组成。所述一个或数几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加是指不超过10个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。

mATA的编码基因mATA也是本发明保护的范围，为如下1)-3)中任一所述的DNA分子：

1)序列表中序列1所示的DNA分子；

2)在严格条件下与1)限定的DNA序列杂交且具有相同功能的DNA分子；

3)与1)限定的DNA序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性且具有相同功能的DNA分子。

上述序列表中的序列1由753个核苷酸组成，编码区为序列1自5’末端第1-753位核苷酸。

含有所述蛋白质的编码基因的重组载体、重组菌、转基因细胞系或表达盒也是本发明保护的范围。

所述重组载体为将所述编码基因插入载体pET-His的EcoRⅠ和NheⅠ识别位点间得到的重组载体。

所述重组菌为将所述重组载体导入宿主菌得到的重组菌。

扩增所述编码基因全长或任一片段的引物对也是本发明保护的范围，所述引物对的一条引物为序列3所示的DNA分子，另一条引物为序列4所示的DNA分子。

本发明的另一个目的是提供一种疫苗，它的活性成分为如下1)-3)中任一一种：1)所述的蛋白质；2)所述的重组载体；3)所述的重组菌。

所述蛋白质在制备疫苗中的应用也是本发明保护的范围；所述编码基因在制备疫苗中的应用也是本发明保护的范围；所述重组载体在制备疫苗中的应用也是本发明保护的范围；所述重组菌在制备疫苗中的应用也是本发明保护的范围。

所述疫苗为相思子毒素疫苗，具体为相思子毒素A链突变体疫苗。

本发明的实验证明，经过点突变获得的突变体mATA，是通过重组表达得到的相思子毒素A链突变体蛋白，通过A链突变体免疫原的免疫途径、剂量、次数、佐剂等多种不同免疫方案，分析相思子毒素A链突变体的免疫保护效果，结果为该突变体具有低毒性、无血管渗漏、有良好免疫原性等特点，可以作为候选疫苗抗原。

附图说明

图1为相思子毒素A链突变体纯化图

图2为相思子毒素A链突变体的SDS-PAGE电泳图

图3为BCA法测定蛋白浓度标准曲线

图4为相思子毒素A链突变体对人肝癌细胞SMMC-7721的杀伤作用曲线

图5为相思子毒素A链突变体对骨髓瘤细胞Sp2/0的杀伤作用曲线