[发明专利]重组人雌激素α受体配体结合域蛋白及其制备和应用

权利要求书

1.一种重组人雌激素α受体配体结合域蛋白，包括人雌激素α受体蛋白的第270位氨基酸残基至第554-595位中任一氨基酸残基的片段，以及连接于该片段N端的6×His标签和C端的Streptag II标签。

2.如权利要求1所述的重组人雌激素α受体配体结合域蛋白，其特征在于，所述片段选自下述片段之一：1)人雌激素α受体蛋白的第270-554位氨基酸残基的片段；2)人雌激素α受体蛋白的第270-595位氨基酸残基的片段。

3.一种重组人雌激素α受体配体结合域蛋白的制备方法，包括以下步骤：

1)通过PCR将人雌激素α受体蛋白的第270位氨基酸残基至第554-595位中任一氨基酸残基的片段的DNA序列克隆出来；

2)将步骤1)得到的DNA序列连接到双标签表达质粒载体中，使该DNA序列的5’端和3’端分别连接6×His标签和Strep tag II标签的编码序列，得到重组蛋白表达质粒；

3)将步骤2)获得的重组蛋白表达质粒转入细胞，表达重组人雌激素α受体蛋白配体结构域蛋白，该蛋白的N端带有6×His标签，C端带有Strep tag II标签；

4)裂解细胞，然后离心取上清；

5)上清液利用Ni亲和层析柱进行第一步亲和纯化，收集洗脱物；

6)在第一步亲和纯化的洗脱物中加入亲和素以屏蔽生物素；

7)将步骤6)处理后的样品用Strep-Tactin Sepharose柱进行第二步亲和层析，收集洗脱物，浓缩保存。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤1)将人雌激素α受体蛋白的第270-554位或第270-595位氨基酸残基的片段的DNA序列克隆出来。

5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤2)所使用的双标签表达质粒载体为pASK-IBA43plus或pEXPR-IBA43。

6.权利要求1所述重组人雌激素α受体配体结合域蛋白在检测环境雌激素污染物中应用。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，将所述重组人雌激素α受体配体结合域蛋白固定化于载体表面，制成雌激素受体亲和吸附剂，用该雌激素受体亲和吸附剂选择性纯化和富集环境中的雌激素污染物。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述载体是能够固定化所述重组人雌激素α受体配体结合域蛋白的凝胶，将重组人雌激素α受体配体结合域蛋白偶联到凝胶上，然后装柱制成雌激素受体亲和柱，利用该雌激素受体亲和柱纯化和富集环境样品中的雌激素污染物。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述载体是Ni-NTA亲和层析凝胶、Strep-TactinSepharose凝胶或CNBr活化的Sepharose 4B凝胶。

10.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述雌激素污染物为下列物质中的一种或多种：17β-雌二醇、己烯雌酚、双酚A、烷基苯酚、大豆苷元、香豆雌酚、雌三醇和雌酮。