[发明专利]重组人雌激素α受体配体结合域蛋白及其制备和应用

说明书

技术领域

本发明涉及如何快速、大量地获取重组人雌激素α受体配体结合域蛋白并将其固定化于载体表面，用于选择性纯化环境雌激素污染物的相关方法，属于生物分析化学领域。

背景技术

环境雌激素是一类能够模仿生物内源性雌激素的功能而对生物内分泌系统产生干扰和破坏作用的外源性化合物，它们广泛存在于环境中，对人类健康造成严重的威胁。近十几年来针对已发现的各种环境雌激素物质，如双酚A、己烯雌酚、烷基苯酚、酞酸酯类化合物和有机氯农药等已经建立了各种各样的分析检测方法。但这些方法主要依赖于根据化合物的极性特点进行提取和纯化，选择性不高，经常由于样品基体的严重干扰而无法准确定性和定量。免疫亲和纯化方法特异性好，但局限于识别抗体对应的抗原分子，对雌激素类化合物并没有普适性，需要逐一制备各化合物的抗体，使用时也达不到高通量检测的要求。为了能够快速了解环境样品中雌激素污染的总体水平，并且及时发现目前未知的其它具有类雌激素性质的人工化学品，迫切需要开发能同时检测样品中所有环境雌激素污染物的组成和含量的高通量、通用型检测技术。

研究表明，环境中的雌激素类污染物对生物体的作用途径和生物效应虽不完全相同，但一般都是通过与雌激素受体结合而产生作用。因此，有效利用雌激素受体来构建环境雌激素类污染物的检测方法是解决上述难题的一条重要途径。现有的环境雌激素污染物的高通量预筛选方法有人体乳腺癌细胞增殖法(MCF-7cell proliferation，简称E-Screen)和重组酵母检测系统(Yeast estrogen screen，简称YES)。然而，实际体系中的环境雌激素污染物与其他物质之间常存在协同效应或拮抗效应，这种相互作用可对上述E-Screen或YES方法造成严重干扰，从而限制了这两种方法的广泛应用。与前述两种方法相比，基于雌激素受体蛋白对具有雌激素活性的化合物的特异性识别作用的体外分析法具有快速、可靠、成本低、重现性好等优点，在实现高通量预筛选方面具有明显的优势。

目前获得人雌激素受体的途径主要有从子宫等组织样品中提取及采用真核细胞表达等，这两类方法都存在过程繁琐、耗时且产量低的缺点，无法满足大量使用的需求，严重制约了相关检测方法的发展。人雌激素α受体蛋白可划分为六个不同的功能结构域，其中能够特异性地与内源或外源性雌激素化合物相结合的配体结合域(LBD)含有约250个氨基酸残基，将包含此配体结合域的蛋白片段单独克隆出来，则有望实现大批量的原核表达并应用于相关雌激素化合物的体外分析。