[发明专利]农杆菌遗传转化大豆子叶节的方法

权利要求书

1.农杆菌遗传转化大豆子叶节的方法，包括含大豆子叶节的外植体的获得、农杆菌的活化、遗传转化、共培养步骤，所述的农杆菌含有携带报告基因和/或外源基因的质粒，其特征在于：所述的遗传转化是用无菌棉棒蘸取经活化的所述的农杆菌涂抹于所述的外植体的子叶节部位。

2.根据权利要求1所述的农杆菌遗传转化大豆子叶节的方法，其特征在于所述的含子叶节的外植体通过如下方法获得：取发育饱满无病害的大豆种子，消毒后将种子在无菌水中浸泡30～60min后接种于B₅培养基，培养5-7d，获得无菌苗；取子叶未完全展开的无菌苗，剥去种皮，切去根和大部分下胚轴，保留3-5mm的下胚轴，沿种子中线切开，分离两片子叶，切除顶芽及初生芽。

3.根据权利要求2所述的农杆菌遗传转化大豆子叶节的方法，其特征在于所述的大豆种子消毒方法为取发育饱满无病害的大豆种子，70％乙醇浸泡30s表面消毒，无菌水冲洗2次；0.1％升汞消毒10min，无菌水冲洗5～6次，每次4～5min。

4.根据权利要求1所述的农杆菌遗传转化大豆子叶节的方法，其特征在于所述的共培养是将遗传转化步骤获得的涂抹了农杆菌的外植体插入共培养培养基，黑暗中共培养3-3.5d。

5.根据权利要求5所述的农杆菌遗传转化大豆子叶节的方法，其特征在于所述的共培养培养基组成为B₅基本培养基+1mM硫代硫酸钠+1mM半胱氨酸+3％蔗糖+1mM二硫苏糖醇+200μmol·L^-1乙酰丁香酮+1.67mg·L^-16-BA+0.25mg·L^-1赤霉素，pH 5.4，+0.7％琼脂。

6.根据权利要求1所述的农杆菌遗传转化大豆子叶节的方法，其特征在于所述的农杆菌为LBA4404、EHA101或KYRT1。

7.根据权利要求6所述的农杆菌遗传转化大豆子叶节的方法，其特征在于所述的农杆菌为LBA4404。

8.根据权利要求1所述的农杆菌遗传转化大豆子叶节的方法，其特征在于所述的报告基因为GUS基因。