[发明专利]一种木瓜蛋白酶的提取工艺

说明书

技术领域  本发明属于木瓜制品技术领域，涉及一种木瓜蛋白酶的提取工艺。

背景技术  木瓜属于蔷薇科，木瓜属。是我国特有的植物品种之一，它有别于南方产的水果番木瓜。木瓜蛋白酶(Papayotin Vegetable Pepsin)是从木瓜割酶采集的或从木瓜瓤或木瓜叶子中提取制备的。木瓜蛋白酶是一种巯基蛋白酶，能分解比胰脏蛋白酶更多的蛋白质。木瓜蛋白酶是由一种单肽链组成，含有212个氨基酸残基，是一种蛋白水解酶，相对分子量为27000。与已知半胱氨酸蛋白酶的一级结构具有高度的同源性，至少具有三个氨基酸残基存在于酶的活性中心部位，它们分别是Cys 25，His 159和ASP 158。另外，6个半胱氨酸基形成了三对二硫链，且都不在活性部位。木瓜蛋白酶可水解蛋白质和多肽中精氨酸和赖氨酸的羟基端，并能优先水解那些在肽键的N-端具有两个羟基的氨基酸或芳香L-氨基酸的肽键。木瓜蛋白酶为白色淡褐色无定形粉末或颗粒，微溶于水、甘油，不溶于乙醚、乙醇和氯仿。水溶液无色或淡黄色，有时呈乳白色，最适PH值为5.0～8.0，微吸湿，有硫化氢臭味。最适的温度为65℃，易变性失活，半胱氨酸、硫化物、亚硝酸盐和乙二胺四乙酸(EDTA)是木瓜蛋白酶的激活剂，过氧化氢是木瓜酶的抑制剂。目前，亟待开发木瓜蛋白酶提取新工艺，为木瓜蛋白酶的应用奠定基础。

发明内容  本发明的目的是提供一种木瓜蛋白酶的提取工艺，以克服现有技术的不足。

为了实现上述目的，本发明木瓜蛋白酶的提取工艺，其要点是按下述工艺操作的：

1)、提取：将采集的木瓜乳液倾入不锈钢锅中，在搅拌的条件下加入含0.1％EDTA-2Na和0.3％NaCl的溶液10ml，并加入每升含0.06mol硫代硫酸钠和0.08mol半胱氨酸溶液2ml，搅拌处理10-30min过滤，收集滤液将，上述滤液置于真空干燥机中，在减压条件下55℃±1℃干燥得粗品；

2)、精制：将步骤1)所得粗品置于搪瓷容器中，在搅拌下加入100ml含有0.1％EDTA-2Na和0.3％NaCL的溶液100ml，并加入每升含0.06mol硫代硫酸钠和0.08mol半胱氨酸的溶液20ml，搅拌处理10-30min，然后用0.1mol/L NaOH或0.1mol/L HCL调pH值为9.0搅匀溶解，再经离心或过滤除去不溶物，得上清液备用，先取上清液100ml做硫酸铵的盐析曲线，得出盐析范围，再向上清液中加硫酸铵至盐析曲线的下限，搅匀、离心除去不溶物，上清液中补加硫酸铵至上限静置，析出结晶，即为木瓜蛋白酶晶体；

3)、干燥：在55℃±1℃鼓风干燥或真空干燥10-30min，即得木瓜蛋白酶产品。

本发明方法制得的木瓜蛋白酶，具有制备工艺简单、生产成本低、酶活力高的特点。

具体实施方式  本发明木瓜蛋白酶的提取工艺，

1、所用试剂：

乙二胺四乙酸二钠EDTA-2Na，用于保持酶的活性化学纯；氢氧化钠NaOH，用于调节PH值化学纯；盐酸HCl，用于调节PH值化学纯；硫化硫酸钠，用于保持酶的活性；氯化钠，用于保持酶的活性；半胱氨酸，用于保持酶的活性；硫酸铵工业级，用于盐析；酪蛋白，用于分析标准蛋白分析纯；磷酸氢二钠，用于配制测定液分析纯；酪氨酸，用于配制测定液分析纯；乙酸钠，用于配制TCA液分析纯；冰醋酸，用于配制TCA液分析纯；石英砂，用作研磨产品医用级；TCA，用作变性剂化学纯；硫酸钙，工业级杀菌剂。

2、木瓜蛋白酶的提取工艺按下述工艺操作：

1)、提取：将采集的木瓜乳液倾入不锈钢锅中，在搅拌的条件下加入含0.1％EDTA-2Na和0.3％NaCl的溶液10ml，并加入每升含0.06mol硫代硫酸钠和0.08mol半胱氨酸溶液2ml，搅拌处理20min过滤，收集滤液将，上述滤液置于真空干燥机中，在减压条件下55℃±1℃干燥得粗品；

2)、精制：将步骤1)所得粗品置于搪瓷容器中，在搅拌下加入100ml含有0.1％EDTA-2Na和0.3％NaCL的溶液100ml，并加入每升含0.06mol硫代硫酸钠和0.08mol半胱氨酸的溶液20ml，搅拌处理20min，然后用0.1mol/L NaOH调pH值为9.0搅匀溶解，再经离心除去不溶物，得上清液备用，先取上清液100ml做硫酸铵的盐析曲线，得出盐析范围，再向上清液中加硫酸铵至盐析曲线的下限，搅匀、离心除去不溶物，上清液中补加硫酸铵至上限静置，析出结晶，即为木瓜蛋白酶晶体；

3)、干燥：在55℃±1℃鼓风干燥30min，即得木瓜蛋白酶产品。