[发明专利]一种水飞蓟宾的检测方法

权利要求书

1.一种水飞蓟宾的检测方法，包括以下步骤：

步骤1、采集含有水飞蓟宾A与水飞蓟宾B的血浆，经沉淀蛋白预处理；

步骤2、将经过预处理的血浆，经液-质联用色谱仪，测定血浆中水飞蓟宾A与水飞蓟宾B浓度。

2.权利要求1的检测方法，其特征在于，所述色谱条件为：色谱柱：Zorbax Eclipse XDB-C₁₈柱体积为150×2.1mm，粒径为5μm，美国Agilent公司；流动相：甲醇-0.1％甲酸为48∶52；流速：0.25mL·min^-1；柱温：30℃；进样量：10μL。

3.权利要求1的检测方法，其特征在于，其中水飞蓟宾A与水飞蓟宾B在血浆中浓度的线性范围为2.0-50000ng·mL^-1，最低定量限为2.0ng·mL^-1，药物的日内、日间精密度在9.1％以内，相对误差小于±5.7％。

4.权利要求1的检测方法，其特征在于，所述预处理包括：取血浆样品100μL置于1.5mLEppendorf管中，依次加入乙腈100μL，内标溶液为200ng·mL^-1柚皮苷溶液，乙腈配置，用量100μL，旋涡1min，然后于12000r·min^-1离心8min，取上清液10μL进行LC-MS/MS测定。

5.权利要求1的检测方法，其特征在于，所述血浆来源于动物，是动物经过服用水飞蓟宾A和水飞蓟宾B药物后经过取血后处理得到的。

6.权利要求5的检测方法，其特征在于，所述服用包括静注和口服。

7.权利要求5的检测方法，其特征在于，所述水飞蓟宾A和水飞蓟宾B药物用以下方法得到：称取水飞蓟宾140mg，溶于25mL聚乙二醇200∶乙醇∶二纯水为5∶2∶3混合溶液中，即得水飞蓟宾静注溶液；取水飞蓟宾胶囊，去壳，混悬于70mL二纯水中，配置成水飞蓟宾的口服液。

8.权利要求1的检测方法，其特征在于，所述液-质联用色谱仪器为Finnigan TSQ Quantum三重四极杆液-质联用仪。

9.权利要求1的检测方法，其特征在于，所述质谱条件为：离子源为电喷雾离子源，负离子方式检测；喷雾电压3800v；毛细管温度390℃；鞘气N₂压力25Psi；辅助气N₂压力3psi；碰撞气Ar压力为1.4mTorr；扫描方式为选择性反应监测SRM；碰撞能量CE分别为水飞蓟宾A和水飞蓟宾B20eV、柚皮苷34eV，用于定量分析的离子反应分别为水飞蓟宾A和水飞蓟宾B m/z481.1→m/z 300.9、柚皮苷m/z 579.2→m/z 271.1。

10.权利要求1的检测方法，其特征在于，所述采集血浆方法如下：静脉注射给予水飞蓟宾静注溶液，灌胃给予水飞蓟宾混悬液，给药后经静脉采集静脉血，置肝素化试管中，离心，分离血浆待测。