[发明专利]一种水飞蓟宾的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种药物检测方法，特别涉及一种治疗肝病的药物水飞蓟宾的检测方法。

背景技术

水飞蓟宾是菊科植物水飞蓟中提取分离得到的黄酮类化合物，具有保肝、护肝等功效。近年来药效学研究表明，水飞蓟宾还具有较强的抗炎，抗肿瘤活性。定天明等采用胶束电泳毛细管色谱法对水飞蓟宾的非对映体(水飞蓟宾A和水飞蓟宾B)进行了分离，从而证明了水飞蓟宾为两个非对映体的混合物，其化学结构见图1。

目前，已有多篇文献报道了水飞蓟宾在动物和人体内的定量分析研究，但有关水飞蓟宾A和水飞蓟宾B各自的药动学研究报道极少。Rickling等采用高效液相色谱-电化学法(HPLC-ECD)测定人血浆中水飞蓟宾A和水飞蓟宾B的浓度，但该方法的灵敏度低，且样品预处理较为繁琐，不能满足药动学研究需要。

本实验建立了一种简单、快速、灵敏的LC-MS/MS方法，同时测定大鼠血浆中水飞蓟宾A和水飞蓟宾B浓度，并成功用于水飞蓟宾A和水飞蓟宾B各自的药动学及生物利用度研究。

发明内容

本发明建立一种简单、快速、灵敏的液-质联用法(LC-MS/MS)，该方法用于测定血浆中水飞蓟宾A与水飞蓟宾B浓度。

本发明的方法，包括以下步骤：

步骤1、含有水飞蓟宾A与水飞蓟宾B的血浆经沉淀蛋白预处理；

步骤2、将经过预处理的血浆，经液-质联用仪，测定其中水飞蓟宾A与水飞蓟宾B浓度。

优选的本发明的方法如下：0.1mL血浆样品经沉淀蛋白预处理后，以甲醇-0.1％甲酸(48∶52，v/v)为流动相，采用Zorbax Eclipse XDB-C₁₈色谱柱(150×2.1mm，5μm)分离，以ESI源负离子模式、选择反应监测(SRM)方式进行定量分析。

本发明的检测方法，其中水飞蓟宾A与水飞蓟宾B在血浆中的线性范围为2.0-50000ng·mL^-1，最低定量限(LLOQ)为2.0ng·mL^-1。药物的日内、日间精密度在9.1％以内，准确度(相对误差)小于±5.7％。

附图说明

图1水飞蓟宾A(a)和水飞蓟宾B(b)的化学结构

图2水飞蓟宾A(a)、水飞蓟宾B(b)和柚皮苷(c)的质谱图

图3血浆样品色谱图

图4水飞蓟宾A和水飞蓟宾B在大鼠体内的平均药-时曲线

a-水飞蓟宾A，静脉注射13.3mg/kg；b-水飞蓟宾A，灌胃给药13.3，26.6 and 53.2mg/kg；

c-水飞蓟宾B，静脉注射14.7mg/kg；d-水飞蓟宾B，灌胃给药14.7，29.4 and 58.8mg/kg.

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步叙述，以使公众对发明内容有更深入的了解，并非对本发明的限制，凡依照本发明公开内容所进行的任何本领域等同替换，均属于本发明的保护范围。

实施例1

1 材料与方法

1.1 药品与试剂

水飞蓟宾A和水飞蓟宾B标准品(天津天士力集团研究院自制，纯度＞98.5％)；内标柚皮苷(中国药品生物制品检定所，纯度＞99.0％，批号：110722-200610)；水飞蓟宾胶囊(天津天士力制药股份有限公司，规格：35mg水飞蓟宾/粒，批号：090509)；乙腈为色谱纯(美国Fisher公司)；其余试剂均为分析纯。

1.2 仪器

Finnigan TSQ Quantum三重四极杆液-质联用仪(美国Finigan公司)；XW-80A微型漩涡混合仪(上海卢西分析仪器厂有限公司)；TG 16W微量高速离心机(长沙平凡仪器仪表有限公司)。

1.3 色谱条件

色谱柱：Zorbax Eclipse XDB-C₁₈柱(150×2.1mm，5μm)，美国Agilent公司；流动相：甲醇-0.1％甲酸(48∶52，v/v)；流速：0.25mL·min^-1；柱温：30℃；进样量：10μL。

1.4 质谱条件