[发明专利]枯草芽孢杆菌LFB112、其产生的细菌素及应用

权利要求书

1.枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)LFB112，保藏号为CGMCCNo.2996。

2.含有权利要求1所述菌株的饲料添加剂。

3.权利要求1所述菌株的发酵培养方法，其特征在于，发酵培养基为改良BPY液体培养基，按重量体积比含有：蛋白胨2％、葡萄糖1％、酵母膏1％、牛肉膏1％、食盐0.3％、磷酸氢二钾0.25％，蒸馏水1000ml，pH值7.2；培养条件为37℃，120转/分钟摇床培养24小时。

4.由权利要求1所述菌株产生的细菌素。

5.如权利要求4所述的细菌素，其特征在于，所述细菌素的SDS-PAGE表观分子量为5500Da。

6.一种生产细菌素的方法，包括如下步骤：

1)制备发酵液：发酵培养权利要求1所述的菌株，得到发酵液；

2)分离细菌素粗品：将得到的发酵液离心取上清，加硫酸铵至饱和度为80％，4℃下静置8～16小时，离心弃去上清得到细菌素粗品；

3)纯化：往沉淀中加入初始发酵液1/100体积的20mM磷酸盐缓冲液以溶解沉淀，然后将沉淀溶液转移至1KDa透析膜，4℃下对蒸馏水透析24小时，透析液用预平衡Q Sepharose FF的阴离子交换层析柱进行纯化，平衡液为pH7.5 20mM的tris-HCl缓冲液，洗脱液为含1MNaCl的tris-HCl缓冲液，流速3ml/min，收集活性峰；再进行Sephadex G-100凝胶过滤层析柱进行纯化，平衡液为pH7.0 10mM的硫酸钠缓冲液，洗脱液为150mM的NaCl溶液，固定流速0.5ml/min，收集活性峰合并为细菌素纯品液。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，其中步骤1)采用权利要求3所述的方法发酵培养枯草芽孢杆菌LFB112。

8.如权利要求6或7所述的方法，其特征在于，其中步骤2)将发酵的得到发酵液经10000转/分钟离心15分钟后取上清液，在上清液中慢慢加入硫酸铵固体粉末进行盐析，边加边搅拌，直至饱和度达80％，然后在4℃下静置12小时，再在12000转/分钟4℃下离心30分钟，弃去上清液得到细菌素粗品。

9.权利要求4或5所述的细菌素在制备生物兽药或饲料添加剂中的应用。