[发明专利]枯草芽孢杆菌LFB112、其产生的细菌素及应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物应用技术，具体涉及一种枯草芽孢杆菌新菌株、其所产生的细菌素及其应用。 

背景技术

自从1929年英国的Fleming发现青霉素以来，抗生素为人类的疾病控制和动物保健作出了巨大的贡献，然而近年来因抗生素滥用导致的耐药问题越用越引起人们的关注和忧虑。在养殖业上，随着抗生素在饲料中的大规模使用，其副作用日益突出，如引起动物肠道菌群失调，临床上出现越来越多的耐药菌株甚至超级病菌“MRSA”(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)，以及畜产品的药物残留等。这些问题的出现不仅影响了养殖业的健康发展，而且残留抗生素通过食物链的传递也加大了人类控制耐药病原菌的难度。为应对日益严重的耐药菌株及药物残留等问题，人们迫切需要研究开发一类安全高效的生物兽药及生物饲料添加剂以减少对抗生素的过分依赖。 

细菌素是由细菌通过核糖体途径合成的肽类抗生素(或蛋白质)，能够抑制与产生菌相近细菌的生长。研究表明，细菌素能够杀死(或抑制)某些致病菌及腐败菌的生长，而且具有pH适应范围广、热稳定性好等特点，因而在动植物疾病防治及食品防腐等方面的应用潜力很大。与传统抗生素相比，细菌素对病原菌作用专一性强、不易产生耐药性且无毒副作用无残留，因而被认为是抗生素的理想替代品而广受关注。 

枯草芽孢杆菌是自然界广泛存在的一类兼性厌氧菌。长期以来该菌一直作为蛋白质水解酶、淀粉酶、生物活性剂、抗生素等生产用菌，由于具有安全无致病性的特点，被美国食品与药品管理局(FDA)认定为“公认安全”(GRAS)的菌株而推荐使用于食品和饲料中。枯草芽孢杆菌能产生70多种抗菌物质，是芽孢杆菌属中的最主要抗菌蛋白产生菌。近年来，国内外有关枯草芽孢杆菌细菌素的应用研究很 多，但主要集中于植物保护和食品防腐剂领域，在医药兽药及饲料添加剂方面研究应用的报道不多。目前细菌素的应用研究存在以下不足：1.发现的细菌素抑菌谱不广，仅能抑制部分革兰氏阳性致病菌，对大肠杆菌、沙门氏菌、绿脓杆菌等主要的革兰氏阴性病原菌及真菌没有抑制力，因而在实际应用上具有很大的局限性；2.没有解决细菌素对临床耐药菌的抑制问题。抗生素的耐药性是当前临床治疗面临的最大问题，据报道美国每年死于超级耐药菌“MRSA”(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)的病人多达1.8万，因而寻找能够抑制耐药菌的细菌素具有现实意义；3.有关的研究仅仅停留在实验室水平，并没有给出具体的生产试验或临床使用的数据，因而在实际应用上缺乏可信的证据。 

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种枯草芽孢杆菌株新菌株。 

本发明的第二个目的在于提供上述菌株在生产细菌素中的应用。 

本发明的第三个目的在于提供一种由上述菌株产生的细菌素。 

本发明的第四个目的在于提供上述细菌素的应用。 

本发明所提供的枯草芽孢杆菌，是枯草芽孢杆菌LFB112，该菌株已于2009年3月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区大屯路甲3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，分类命名为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，保藏号为CGMCC No.2996。 

本发明菌株LFB112在常温和常规培养基上生长良好，在营养肉汤(NB)培养基上菌落呈乳白色，表面粗糙，有粘性，为革兰氏阳性菌。根据API 50CHB生化试剂盒(bioMerieux，France)结合API Plus软件(V3.0)鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌(鉴定度为96.7％)，使用ABI3730XL自动序列仪(Applied Biosystems，USA)测定该菌株的16SrDNA序列测定，并与美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库进行BLAST比对，同源性最高的菌株为Bacillus subtilis菌株(DQ523502)，同源性为99.2％，因此进一步确定该菌株为枯草芽孢杆菌。该菌株具有较高的抑菌活性，对多株动物致病菌及食源致病菌 具有抑菌作用。 

可采用常规方法发酵培养枯草芽孢杆菌LFB112，优选采用改良BPY(牛肉膏蛋白胨酵母粉)培养基：蛋白胨2％、葡萄糖1％、酵母膏1％、牛肉膏1％、食盐0.3％、磷酸氢二钾0.25％，蒸馏水1000ml，pH值7.2，所述百分含量均为(W/V)；培养条件为37℃，120转/分钟摇床培养24小时。 

LFB112发酵培养得到的发酵液中含有细菌素，具有良好的抑菌作用。 

进而，本发明还提供一种制备细菌素的方法，其包括如下步骤：