[发明专利]一种酶溶性胶原蛋白的制备方法

权利要求书

1.一种酶溶性胶原蛋白的制备方法，其特征在于，其步骤如下：

（1）原料处理：以鱼皮或者其它动物组织为原料，用水清洗后，于0-40℃用0.05—5.0mol/L的NaOH溶液浸泡1-50小时，在浸泡过程中，每隔1-5小时，换浸泡液一次，得去除杂蛋白的原料；然后用洗涤剂或有机溶剂浸泡1-50小时，再用0-30℃水清洗，得去除脂肪的原料；

（2）胶原蛋白提取：向处理后的原料中添加0.05—10mol/L 的醋酸、柠檬酸或盐酸溶液作提取剂进行浸提2-72h，浸提温度为0-40℃，同时加入原料重量的0.05-10%的胃蛋白酶，原料与提取剂的重量比为1：5—100，浸提后过滤，所得滤液为酶溶性胶原蛋白粗提液；

（3）胶原蛋白纯化并钝化酶的活性：在搅拌条件下向酶溶性胶原蛋白粗提液中加入0.5-5.0 mol/L的氢氧化钠溶液调节其pH至7.0-12，0-40℃静置2-72小时，得蛋白质凝胶，然后取蛋白质凝胶用0.05—10mol/L 的醋酸、柠檬酸或盐酸溶液溶解，得蛋白质凝胶溶液，再用蒸馏水透析1-8天，冷冻干燥，即得酶溶性胶原蛋白。

2.根据权利要求1所述的酶溶性胶原蛋白的制备方法，其特征在于：步骤（1）中所述的有机溶剂为丙酮、四氯化碳或己烷。

3.根据权利要求1所述的酶溶性胶原蛋白的制备方法，其特征在于，其步骤如下：

（1）原料处理：以鱼皮或者其它动物组织为原料，用水清洗后，于4-5℃用0.5—2.0mol/L的NaOH溶液浸泡20--30小时，在浸泡过程中，每隔3-5小时，换浸泡液一次，得去除杂蛋白的原料；然后用洗涤剂或有机溶剂浸泡20-30小时，再用0-5℃水清洗，得去除脂肪的原料；

（2）胶原蛋白提取：向处理后的原料中添加0.1—1.0mol/L 的醋酸、柠檬酸或盐酸溶液作提取剂进行浸提48-72h，浸提温度为3-10℃，同时加入原料重量的0.5-2.0%的胃蛋白酶，原料与提取剂的重量比为1：20—50，浸提后过滤，所得滤液为酶溶性胶原蛋白粗提液；

（3）胶原蛋白纯化并钝化酶的活性：在搅拌条件下向酶溶性胶原蛋白粗提液中加入0.5-2.0 mol/L的氢氧化钠溶液调节其pH至10.0-12.0，0-4℃静置40-50小时，得蛋白质凝胶，然后取蛋白质凝胶用0.1—1.0mol/L 的醋酸、柠檬酸或盐酸溶液溶解，得蛋白质凝胶溶液，再用蒸馏水透析2-3天，冷冻干燥，即得酶溶性胶原蛋白。

4.根据权利要求1或2或3所述的酶溶性胶原蛋白的制备方法，其特征在于：取步骤（3）所制得的酶溶性胶原蛋白，重复步骤（3）所述的提纯步骤1-2次，得到进一步纯化以及酶进一步钝化的酶溶性胶原蛋白。