[发明专利]一种酶溶性胶原蛋白的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种胶原蛋白的制备方法，特别是一种酶溶性胶原蛋白的制备方法。

背景技术

胶原蛋白是动物支持结构最主要的组成部分，在人体中是皮肤、血管、骨骼、软骨及结缔组织最主要的蛋白质。胶原蛋白是一大类蛋白质，从不同组织中分离得到的胶原蛋白在肽链、氨基酸组成、物化性质、胶原蛋白构型等方面有非常显著的差异，本发明主要针对的是数量最丰富的I型胶原蛋白。目前我国胶原蛋白生产主以猪、牛等的皮、腱等为原料经过提取、纯化得到。

现有技术中胶原蛋白的提取过程基本都是将原料经过氢氧化钠脱除杂蛋白后直接采用低温长时间浸泡提取的工艺，一般以0.5M醋酸在4℃左右浸泡72-96小时，在提取过程中加入胃蛋白酶，然后过滤得到粗酶溶性胶原蛋白。在粗酶溶性胶原蛋白溶液中加入Tris使其最终的浓度为0.5M，然后再加入氯化钠使其最终浓度为2.5M，使胶原蛋白会不断的析出。再次进行冷冻离心，取其沉淀，用0.5M醋酸将沉淀溶解，然后装入透析袋中，用0.02M磷酸氢二钠和蒸馏水分别进行透析；透析以后得到的胶原蛋白经过冷冻干燥工艺，得到酶溶性胶原蛋白。其缺陷在于：该方法成本高，制备的酶溶性胶原蛋白的热稳定性差，制备工艺复杂。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种工艺更为简单、可同时提高产品热稳定性与得率的酶溶性胶原蛋白的制备方法。

本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本发明是一种酶溶性胶原蛋白的制备方法，其特点是，其步骤如下：

（1）原料处理：以鱼皮或者其它动物组织为原料，用水清洗后，于0-40℃用0.05—5.0mol/L的NaOH溶液浸泡1-50小时，在浸泡过程中，每隔1-5小时，换浸泡液一次，得去除杂蛋白的原料；然后用洗涤剂或有机溶剂浸泡1-50小时，再用0-30℃水清洗，得去除脂肪的原料；

（2）胶原蛋白提取：向处理后的原料中添加0.05—10mol/L 的醋酸、柠檬酸或盐酸溶液作提取剂进行浸提2-72h，浸提温度为0-40℃，同时加入原料重量的0.05-10%的胃蛋白酶，原料与提取剂的重量比为1：5—100，浸提后过滤，所得滤液为酶溶性胶原蛋白粗提液；

（3）胶原蛋白纯化并钝化酶的活性：在搅拌条件下向酶溶性胶原蛋白粗提液中加入0.5-5.0 mol/L的氢氧化钠溶液调节其pH至7.0-12，0-40℃静置2-72小时，得蛋白质凝胶，然后取蛋白质凝胶用0.05—10mol/L 的醋酸、柠檬酸或盐酸溶液溶解，得蛋白质凝胶溶液，再用蒸馏水透析1-8天，冷冻干燥，即得酶溶性胶原蛋白。

本发明所述的酶溶性胶原蛋白的制备方法的步骤（1）中所述的有机溶剂可以为现有技术中可适用于本发明用于去除原料中的脂肪的有机溶剂，优选为丙酮、四氯化碳或己烷。所述的洗涤剂为常规的日用品洗涤剂，优选安利公司生产的碟新洗涤剂。

本发明所采用的原料可以为水产加工过程中产生的下脚料—鱼皮，如鲤鱼皮、鲢鱼皮、鳕鱼皮等等；所述的其它动物组织可以为猪、牛等的皮、腱等。

本发明的优选技术方案是：一种酶溶性胶原蛋白的制备方法，其特点是，其步骤如下：

（1）原料处理：以鱼皮或者其它动物组织为原料，用水清洗后，于4-5℃用0.5—2.0mol/L的NaOH溶液浸泡20--30小时，在浸泡过程中，每隔3-5小时，换浸泡液一次，得去除杂蛋白的原料；然后用洗涤剂或有机溶剂浸泡20-30小时，再用0-5℃水清洗，得去除脂肪的原料；

（2）胶原蛋白提取：向处理后的原料中添加0.1—1.0mol/L 的醋酸、柠檬酸或盐酸溶液作提取剂进行浸提48-72h，浸提温度为3-10℃，同时加入原料重量的0.5-2.0%的胃蛋白酶，原料与提取剂的重量比为1：20—50，浸提后过滤，所得滤液为酶溶性胶原蛋白粗提液；

（3）胶原蛋白纯化并钝化酶的活性：在搅拌条件下向酶溶性胶原蛋白粗提液中加入0.5-2.0 mol/L的氢氧化钠溶液调节其pH至10.0-12.0，0-4℃静置40-50小时，得蛋白质凝胶，然后取蛋白质凝胶用0.1—1.0mol/L 的醋酸、柠檬酸或盐酸溶液溶解，得蛋白质凝胶溶液，再用蒸馏水透析2-3天，冷冻干燥，即得酶溶性胶原蛋白。

本发明所要解决的技术问题还可以通过以下的技术方案来进一步实现。以上所述的酶溶性胶原蛋白的制备方法，其特点是：取步骤（3）所制得的酶溶性胶原蛋白，重复步骤（3）所述的提纯步骤1-2次，得到进一步纯化以及酶进一步钝化的酶溶性胶原蛋白。