[发明专利]一种辅助鉴定马铃薯A病毒的试剂及其应用

权利要求书

1.一种辅助鉴定马铃薯A病毒的试剂，包括特异引物；所述特异引物由序列表的序列1所示DNA、序列表的序列2所示DNA、序列表的序列4所示DNA和序列表的序列5所示DNA组成。

2.如权利要求1所述的试剂，其特征在于：所述试剂由所述特异引物、特异探针甲和特异探针乙组成；所述特异探针甲的核苷酸序列如序列表的序列3所示；所述特异探针乙的核苷酸序列如序列表的序列6所示。

3.如权利要求2所述的试剂，其特征在于：所述特异探针甲为TaqMan探针；所述特异探针乙为TaqMan探针。

4.权利要求1至3中任一所述的试剂在制备辅助鉴定马铃薯A病毒的试剂盒中的应用。

5.一种辅助鉴定马铃薯A病毒的试剂盒，包括权利要求1至3中任一所述的试剂。

6.权利要求1至3中任一所述的试剂在辅助鉴定马铃薯A病毒中的应用。

7.一种辅助鉴定马铃薯A病毒的方法，包括如下步骤：以待测病毒的cDNA为模板，用特异引物对甲进行PCR，得到PCR产物甲；以待测病毒的cDNA为模板，用特异引物对乙进行PCR，得到PCR产物乙；如果PCR产物甲为73bp且PCR产物乙为76bp，待测病毒为候选的马铃薯A病毒；所述特异引物对甲为序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA组成的引物对；所述特异引物对乙为序列表的序列4所示DNA和序列表的序列5所示DNA组成的引物对。

8.一种辅助鉴定马铃薯A病毒的方法，包括如下步骤：以待测病毒的cDNA为模板，用特异引物对甲和特异探针甲进行实时荧光PCR，得到扩增曲线甲；以待测病毒的cDNA为模板，用特异引物对乙和特异探针乙进行实时荧光PCR，得到扩增曲线乙；根据扩增曲线甲和扩增曲线乙判断待测病毒是否为候选的马铃薯A病毒；所述特异引物对甲为序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA组成的引物对；所述特异引物对乙为序列表的序列4所示DNA和序列表的序列5所示DNA组成的引物对；所述特异探针甲为TaqMan探针，核苷酸序列如序列表的序列3所示；所述特异探针乙为TaqMan探针，核苷酸序列如序列表的序列6所示。

9.如权利要求7或8所述的方法，其特征在于：所述待测病毒为马铃薯A病毒、马铃薯V病毒、马铃薯Y病毒或香石竹环斑病毒。

10.一种检测待测样本中是否含有马铃薯A病毒的方法，包括如下步骤：

(1)提取待测样本的总RNA，反转录为cDNA；

(2)以所述cDNA为模板，用特异引物对甲和特异探针甲进行实时荧光PCR，得到扩增曲线甲；以所述cDNA为模板，用特异引物对乙和特异探针乙进行实时荧光PCR，得到扩增曲线乙；根据扩增曲线甲和扩增曲线乙判断待测样本中是否含有马铃薯A病毒；所述特异引物对甲为序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA组成的引物对；所述特异引物对乙为序列表的序列4所示DNA和序列表的序列5所示DNA组成的引物对；所述特异探针甲为TaqMan探针，核苷酸序列如序列表的序列3所示；所述特异探针乙为TaqMan探针，核苷酸序列如序列表的序列6所示。