[发明专利]一种辅助鉴定马铃薯A病毒的试剂及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种辅助鉴定马铃薯A病毒的试剂及其应用。

背景技术

马铃薯A病毒(Potato virus A，PVA)，属于马铃薯Y病毒属(Potyvirus)成员，主要在日本、美国、欧洲各国发生，我国局部分布，正在采取控制措施。PVA是我国一种重要的进境检疫性植物病毒。

马铃薯A病毒的自然寄主要为马铃薯，也可侵染其他茄科植物。PVA单独侵染引起花叶或皱叶，对马铃薯影响较大，严重时可造成减产40％以上(程晔，陈炯，陈剑平，杭州郊区马铃薯A病毒分离物的基因组3’-末端序列测定及系统化分析[J].浙江农业学报，2002，14(2)：71-75.)。若与其它病毒如马铃薯X、Y病毒和马铃薯M病毒等复合侵染，则加重症状和产量损失，危害更大(Hooker WJ.Compendium of Potatodisease[M].St.Paul.MN：The American Phytopathological Society，1981.)。PVA能被多种蚜虫非持久性传播；另外，该病毒在马铃薯上系统侵染，能够进入薯块，薯块带毒率高，因此也能随种薯和组培苗传播。由于有蚜虫，该病毒在田间扩散容易，特别是马铃薯和其他茄科作物在同一地区出现时，能加速该病毒的扩散。当种薯生产体系尚未完全建立，自留地比较普遍时，该病毒极易扩散。

马铃薯具有很高的食用和经济价值，近年来，已上升为我国第四大粮食作物，对于维护我粮食安全具有重要意义。许多国家看好中国马铃薯市场，大量的马铃薯种薯输入或将要输入我国。引进的马铃薯种薯携带马铃薯A病毒的机率极大。为了维护我国马铃薯这一巨大产业健康发展、防止马铃薯A病毒随马铃薯种薯等进境物传入中国并尽量减少国际贸易摩擦，开发出快速、灵敏检测马铃薯A病毒的先进的技术，意义重大。

目前，检测马铃薯A病毒的方法主要以酶联免疫吸附测定(ELISA)为主(王秀芬，刘伟等，引进加拿大马铃薯种薯中病毒的检测[J].植物检疫，2002，16(1)：16-18.；刘洪义，李明福等，黑龙江马铃薯病毒病的普查及鉴定[J].东北农业大学学报，2006，37(3)：307-310.；高海霞，邹明强等，流式微球一步法快速免疫检测马铃薯A病毒[J].微生物学报，48(3)：380-384.)，也有少数采用RT-PCR凝胶电泳技术的研究报道(吴兴泉，谢联辉等，福建马铃薯A病毒的分子鉴定及检测技术[J].农业生物技术学报，2004，12(1)：90-95.；袁青，殷幼平等，二重RT-PCR快速检测马铃薯病毒的方法[J].植物检疫，2005，19(3)：135-138.)。ELISA技术操作步骤繁琐、检测周期长、灵敏度低、易出现假阳性；PCR凝胶电泳技术较ELISA在多个方面有所提高，但易于造成污染。未见采用实时荧光PCR检测PVA的研究报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种辅助鉴定马铃薯A病毒的试剂及其应用。

本发明提供的辅助鉴定马铃薯A病毒的试剂，包括特异引物；所述特异引物由序列表的序列1所示DNA、序列表的序列2所示DNA、序列表的序列4所示DNA和序列表的序列5所示DNA组成。

所述试剂可由所述特异引物、特异探针甲和特异探针乙组成；所述特异探针甲的核苷酸序列如序列表的序列3所示；所述特异探针乙的核苷酸序列如序列表的序列6所示。

所述特异探针甲可为TaqMan探针，核苷酸序列如序列表的序列3所示。所述特异探针乙可为TaqMan探针，核苷酸序列如序列表的序列6所示。

所述试剂可用于制备辅助鉴定马铃薯A病毒的试剂盒。

本发明还保护一种辅助鉴定马铃薯A病毒的试剂盒，它包括所述试剂。

所述试剂可用于辅助鉴定马铃薯A病毒。

本发明还保护一种辅助鉴定马铃薯A病毒的方法，包括如下步骤：以待测病毒的cDNA为模板，用特异引物对甲进行PCR，得到PCR产物甲；以待测病毒的cDNA为模板，用特异引物对乙进行PCR，得到PCR产物乙；如果PCR产物甲为73bp且PCR产物乙为76bp，待测病毒为候选的马铃薯A病毒；所述特异引物对甲为序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA组成的引物对；所述特异引物对乙为序列表的序列4所示DNA和序列表的序列5所示DNA组成的引物对。