[发明专利]一种辅助鉴定藜草花叶病毒的试剂及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种辅助鉴定藜草花叶病毒的试剂及其应用。

背景技术

藜草花叶病毒(Sowbane mosaic virus，SoMV)，属于南方菜豆花叶病毒成员。该病毒分布在世界近30个国家和地区，包括澳洲、北美、南美、南非、澳大利亚、保加利亚、加拿大、前捷克斯洛伐克、意大利、日本、前南斯拉夫、奥地利、波兰、瑞士、德国、比利时、荷兰、英国、爱尔兰、法国、希腊、葡萄牙、西班牙、罗马尼亚、匈牙利、阿尔巴尼亚、土耳其、摩洛哥。该病毒在中国无报道，是我国进境重要的检疫性病毒种类之一(《中华人民共和国进境植物检疫性有害生物名录》(2007年最新版).)。藜草花叶病毒的自然寄主较多，如苹果、葡萄、樱桃、香石竹、菊花等，这些寄主植物在我国都有大面积的种植，我国的气候条件也与世界上该病毒的许多疫区的气候条件相似，因此该病毒一旦传入我国，可导致严重危害。该病毒可被多种植物的种子传播：昆诺阿藜(Chenopodium aqinoa)种传率60％以上；墙生藜(Chenopodiummurale)种传率20-70％。病株子代幼苗感染率高达83％；苋色藜(Chenopodiumamaranticlolor)种传率34-62％。花粉、受侵染的植物也可传播病毒。我国每年都有大量的种子、苗木进入，因此该病毒具有较高的传入可能性。

近年来，每年从国外输入中国的葡萄等种子、苗木数量较大，其中可能携带有SoMV。由于我国藜草花叶病毒的寄主植物种类多、种植面积大，该病毒一旦传入我国，将对我国的葡萄、苹果等产业带来严重影响。进境种子、苗木中植物病毒的检测是我国检验检疫系统的重点，也是难点，尤其是木本植物中病毒的检测，由于它们在植株体内含量低、分布不均，且时有复合侵染等特殊性，传统的方法，极易出现漏检和误检。为了维护葡萄、苹果等产业健康发展，防止藜草花叶病毒随种子、苗木传入中国，开发出快速、灵敏检测该病毒的先进的技术，意义重大。为了保障我国苹果、葡萄等产业的健康发展，开发先进的检测技术，防止藜草花叶病毒传入我国具有重要意义。

目前，检测藜草花叶病毒主要以电镜技术(Kerlan C，Mille B，DunezJ.Immunosorbent electron；microscopy for detecting apple chlorotic leaf spotand plum pox viruses.Phytopathology，1981，71：400～404.)和酶联免疫吸附测定(ELISA)为主(Cambra M，Asensio M，Gorris M T，et al.Detection of plum poxpotyvirIls using monoclonalantibodies to structural and non-structuralproteins.Blletin OEPP/EPPO，1994，24：569-577.)。电镜技术设备昂贵，检测灵敏度低；ELISA技术操作步骤繁琐、检测周期长、灵敏度低、易出现假阳性。未见有采用实时荧光PCR检测SoMV的研究报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种辅助鉴定藜草花叶病毒的试剂及其应用。

本发明提供的辅助鉴定藜草花叶病毒的试剂，包括特异引物；所述特异引物由序列表的序列1所示DNA、序列表的序列2所示DNA和序列表的序列3所示DNA组成。

所述试剂可由所述特异引物和特异探针组成；所述特异探针的核苷酸序列如序列表的序列4所示。所述特异探针可为TaqMan探针。

所述试剂可用于制备辅助鉴定藜草花叶病毒的试剂盒。

本发明还保护一种辅助鉴定藜草花叶病毒的试剂盒，包括所述试剂。

所述试剂可用于辅助鉴定藜草花叶病毒。

本发明还保护一种辅助鉴定藜草花叶病毒的方法，包括如下步骤：以待测病毒的cDNA为模板，用特异引物对甲进行PCR，得到PCR产物甲；以待测病毒的cDNA为模板，用特异引物对乙进行PCR，得到PCR产物乙；如果PCR产物甲为78bp且PCR产物乙为97bp，待测病毒为候选的藜草花叶病毒；所述特异引物对甲为序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA组成的引物对；所述特异引物对乙为序列表的序列1所示DNA和序列表的序列3所示DNA组成的引物对。