[发明专利]一种新型高分子脂质体及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种新型高分子脂质体及其制备方法，属于药物技术领域。

背景技术

脂质体(liposome)是由磷脂或其他类脂化合物双层膜构成的，当两性分子如磷脂和鞘脂分散于水相时，分子的疏水尾部倾向于聚集在一起，避开水相，而亲水头部暴露在水相，形成具有双分子层结构的的封闭囊泡。脂质体是目前用做药物基因载体常见的制剂手段之一。但是以传统的卵磷脂、胆固醇制备的常规脂质体在体内多被网状内皮系统(reticuloendothelial system，RES)吞噬，在血液循环中驻留时间较短。并且其物理化学稳定性差，储存和应用过程中容易发生融合聚集，疏水性药物包封率低，包封药物容易泄漏；药物突释，官能团少，不易进行表面修饰，无靶向性、功能单一；用做基因载体时基因转染效率仍显著低于病毒载体；制备和纯化步骤多等。近年来，开发新型脂质体的研究受到广泛关注。

王汉杰等(Hanjie Wang，Peiqi Zhao，Xiaofei Liang，et al.Folate-PEG coated cationic modified chitosan-Cholesterol liposomes for tumor-targeted drug delivery[J].Biomaterials，2010，31(14)：4129-2138)使用聚乙二醇(PEG)及叶酸修饰的赖氨酸壳聚糖十八烷基季铵盐(OQLCS)代替卵磷脂，与胆固醇通过反相蒸发法或薄膜分散法制备了一种高分子脂质体，聚乙二醇修饰延长了高分子脂质体在血液中的驻留时间，叶酸修饰赋予了高分子脂质体靶向性能。这种高分子脂质体与传统脂质体相比具有较好的缓控释功能，较高的药物包封率，更高的物理化学稳定性，并且由于其表面带正电，可吸附携带基因，用做基因载体。但是由于赖氨酸壳聚糖十八烷基季铵盐分子链上含有大量氨基，使制备的高分子脂质体具有很强的正电性，因而使其具有很大的细胞毒性，限制了其应用。

发明内容

鉴于目前脂质体存在的缺陷，为了使脂质体更好的应用于药物基因载体，本发明提供一种Zeta正电性低，细胞毒性小，粒径更均匀的新型高分子脂质体及其制备方法。

γ-聚谷氨酸(γ-Polyglutamic acid，γ-PGA)是由L-谷氨酸、D-谷氨酸通过γ-酰胺键结合形成的一种水溶性高分子氨基酸聚合物，具有良好的生物相容性和生物降解性，可食用，在体内降解产物为氨基酸，对人体无毒害。对γ-聚谷氨酸进行双亲性改性后，可与胆固醇制备一种高分子脂质体，这种高分子脂质体具有操作简便、适用性强、成本低的优点，并且粒径分布更为均匀，体系稳定，由于γ-聚谷氨酸侧链含有大量的羧基，容易进行多功能化且羧基带有负电性，所以其细胞毒性较低。这种高分子脂质体可同时或分别包载水溶性、油溶性和双亲性物质，包括药物、基因、磁性颗粒和量子点等，并且在高分子脂质体表面可连接多种靶向制剂。

本发明首先利用γ-聚谷氨酸(重均分子量30000-40000)与二甲基环氧丙基十八烷基氯化铵反应制备了一种双亲性高分子γ-聚谷氨酸十八烷基季铵盐(OQPGA)，与赖氨酸壳聚糖十八烷基季铵盐相比，由于γ-聚谷氨酸十八烷基季铵盐分子链上正电性基团少，使其电性相对较低，因而用做载体时具有较小的细胞毒性。然后利用γ-聚谷氨酸十八烷基季铵盐与胆固醇通过反相蒸发法或薄膜分散法制备了这种新型高分子脂质体。如图3粒度分析测试结果所示，制备的这种高分子脂质体粒径小于150nm，可以在血液中自由运行。如图2透射照片所示，其粒径均匀，分散性好。如图4的Zeta电位分析图，Zeta电位正电性较低，因而可降低正电性造成的细胞毒性。

本发明的技术方案如下：

本发明的一种新型高分子脂质体，是二甲基环氧丙基十八烷基氯化铵与γ-聚谷氨酸反应，形成γ-聚谷氨酸十八烷基季铵盐，结构式如下：

该双亲性高分子与胆固醇制备成一种新型高分子脂质体，粒径在70～130nm，Zeta电位为6～8mV。

γ-聚谷氨酸十八烷基季铵盐制备步骤如下：

a.将原料质量份数配比为：γ-聚谷氨酸∶二甲基环氧丙基十八烷基氯化铵＝1∶25～50加入到反应器，然后向反应器中加入溶剂异丙醇，磁力搅拌，加热至50～70℃，冷凝回流反应1-5天；

b.反应结束后，将产物使用旋转蒸发仪将异丙醇蒸出，随后将产物放入8000-14000的透析袋中透析3-10天，取下层凝胶，过滤冻干，即得γ-聚谷氨酸十八烷基季铵盐。

本发明的新型高分子脂质体制备方法，采用反相蒸发法，制备步骤如下：