[发明专利]一种冻存细胞的方法

权利要求书

1.一种冻存细胞的方法，其特征在于，它按以下步骤操作：

a.细胞的消化：用胰蛋白酶液消化细胞后，弃去消化液，加入含有10%小牛血清的细胞培养液，使细胞悬浮，以800-1000 r/min离心5 min，弃去上清液；

b.冻存液稀释细胞：用冻存液将细胞沉淀悬浮，调整至适合的细胞密度后分装于细胞冻存管中；

c.冷冻降温：将冻存管直立放入聚苯乙烯保温盒中，封好聚苯乙烯保温盒盖，放于-80℃低温设备中，静置12~16小时；

d.浸入液态氮：将冻存管从聚苯乙烯保温盒中取出迅速浸入液氮中，长期保存。

2.根据权利要求1所述的冻存细胞的方法，其特征在于，所述步骤a中胰蛋白酶液的质量浓度为0.25% 。

3.根据权利要求2所述的冻存细胞的方法，其特征在于，所述步骤a中细胞培养液为MEM、DMEM、RPMI-1640或M199。

4.根据权利要求3所述的冻存细胞的方法，其特征在于，所述步骤b中冻存液由20%的胎牛血清、10%的二甲基亚砜和70%的细胞培养液组成；所述细胞培养液为MEM、DMEM、RPMI-1640或M199。

5.根据权利要求4所述的冻存细胞的方法，其特征在于，所述步骤b中细胞密度为1×106~1×107个/ml。

6.根据权利要求5所述的冻存细胞的方法，其特征在于，所述步骤c中聚苯乙烯保温盒的结构尺寸为：壁厚1.4-1.6cm，长20-25cm、宽15-20cm、高10cm。