[发明专利]一株产新结构镇痛作用单吲哚化合物的大肠杆菌工程菌5C11及其含的深海宏基因组基因簇

权利要求书

1.一种含有苯和甲苯降解功能基因簇基因，其特征在于，序列如SEQ ID NO 1所示。

2.一株含有权利要求1所述降解苯和甲苯降解功能基因簇的大肠杆菌工程菌EPI3005C11(Escherichia coli EPI3005C11)，其特征在于，该工程菌的保藏号为：CCTCC NO：M2010243。

3.如权利要求2所述的大肠杆菌工程菌5C11在降解苯酚中的应用。

4.一种获得权利要求2所述的大肠杆菌工程菌5C11的方法，包括如下步骤：

(1).深海沉积物样品的富集：取出4°保存的深海沉积物样品10g，于人工海水放线菌富集培养基进行富集培养；

(2)，深海沉积物富集样品DNA提取：加入DNA提取缓冲液，使细胞裂解，然后从样品中直接提取DNA并纯化；

(3)，深海沉积物富集样品宏基因组文库的构建：质粒载体(Fosmid，插入片段40～45kb)，宿主是大肠杆菌(Escherichia coli)，获得约3000个克隆子；

(4)，宏基因组文库筛选：功能驱动的筛选即基于活性的筛选；化合物结构水平的筛选；序列驱动的筛选；

(5)，通过对克隆子的发酵物的乙酸乙酯萃取物活性进行检测，得到工程菌。

5.如权利要求2所述的大肠杆菌工程菌5C11在制备一种具有镇痛作用的单吲哚化合物中的应用，该单吲哚化合物具有下列结构：

6.如权利要求2所述的大肠杆菌工程菌5C11在制备一种具有镇痛作用的单吲哚化合物中的应用，其特征在于：发酵培养大肠杆菌工程菌5C11，获取含有该单吲哚化合物的发酵物，然后从该发酵物中分离纯化该单吲哚化合物。