[发明专利]一种溶菌酶的晶胶吸附层析分离方法有效
| 申请号： | 201010567727.X | 申请日： | 2010-11-30 |
| 公开（公告）号： | CN102021158A | 公开（公告）日： | 2011-04-20 |
| 发明（设计）人： | 沈绍传;贠军贤;姚克俭 | 申请（专利权）人： | 浙江工业大学 |
| 主分类号： | C12N9/36 | 分类号： | C12N9/36 |
| 代理公司： | 杭州天正专利事务所有限公司 33201 | 代理人： | 黄美娟;俞慧 |
| 地址： | 310014 *** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 溶菌酶 吸附 层析 分离 方法 | ||
1.一种溶菌酶的晶胶吸附层析分离方法，包括如下步骤：
(1)用pH值6.0～10.5的缓冲溶液稀释含有溶菌酶的混合液得到上样液，以0.1～25cm/min的流速上晶胶床柱，进行吸附；
(2)以去离子水或pH值6.0～10.5的缓冲溶液为冲洗液，冲洗掉晶胶内未被吸附的杂质；
(3)用含有0.02～3M碱金属盐的pH值6.0～10.5的缓冲溶液为洗脱液，进行洗脱，收集含溶菌酶的洗脱峰，得到所述的溶菌酶。
2.如权利要求1所述的溶菌酶的晶胶吸附层析分离方法，其特征在于步骤(1)中所述的含有溶菌酶的混合液为鸡蛋清或预处理后的鸡蛋清；所述的预处理后的鸡蛋清是指先用0.1～1M的盐酸溶液将蛋清的pH调至6.0-7.0，离心后将其上清液的pH用0.1～1M的氢氧化钠溶液调至7.0～10.0范围，再次离心后的上清液。
3.如权利要求1所述的溶菌酶的晶胶吸附层析分离方法，其特征在于所述晶胶床柱中的晶胶介质为阳离子交换型，其功能基团为磺酸基。
4.如权利要求1所述的溶菌酶的晶胶吸附层析分离方法，其特征在于步骤(2)中所述冲洗液的流速在0.1～25cm/min。
5.如权利要求1所述的溶菌酶的晶胶吸附层析分离方法，其特征在于步骤(3)中的洗脱为梯度洗脱，洗脱液流速0.2～20cm/min，先用含碱金属盐0.02～0.15M的pH值6.0～10.5的缓冲溶液进行洗脱，再用碱金属盐含量相应更高的pH值6.0～10.5的缓冲溶液进行洗脱，收集含溶菌酶的洗脱峰，得到所述的溶菌酶。
6.如权利要求1所述的溶菌酶的晶胶吸附层析分离方法，其特征在于所述的碱金属盐为NaCl或KCl。
7.如权利要求1所述的溶菌酶的晶胶吸附层析分离方法，其特征在于所述的缓冲溶液选自下列之一：①pH 6.0～8.0磷酸盐缓冲溶液、②pH 7.1～9.0Tris-盐酸缓冲溶液、③pH 9.1～10.5碳酸盐缓冲溶液。
8.如权利要求1～7之一所述的溶菌酶的晶胶吸附层析分离方法，其特征在于依次用0.1M HCl、1～2M NaCl和去离子水对步骤(3)使用过的晶胶床柱进行再生。
9.如权利要求1所述的溶菌酶的晶胶吸附层析分离方法，其特征在于所述方法按照如下步骤进行：
(a)以pH值6.0～10.5的缓冲溶液平衡晶胶床柱；所述晶胶床柱中的晶胶介质为阳离子交换型，其功能基团为磺酸基；
(b)用pH值6.0～10.5的缓冲溶液稀释鸡蛋清或预处理后的鸡蛋清得到上样液，以0.1～25cm/min的流速上晶胶床柱，进行吸附；
(c)以去离子水或pH值6.0～10.5的缓冲溶液为冲洗液，以0.1～25cm/min的流速冲洗掉晶胶内未被吸附的杂质；
(d)用含有0.02～3M碱金属盐的pH值6.0～10.5的缓冲溶液为洗脱液，进行梯度洗脱，先用含碱金属盐0.02～0.15M的pH值6.0～10.5的缓冲溶液进行洗脱，再用碱金属盐含量相应更高的pH值6.0～10.5的缓冲溶液进行洗脱，洗脱液流速0.2～20cm/min，收集含溶菌酶的洗脱峰，得到所述的溶菌酶；所述的碱金属盐为NaCl或KCl；
(e)依次用0.1M HCl、1～2M NaCl和去离子水对晶胶床柱进行再生。
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