[发明专利]一种快速分离骨髓间充质干细胞的试剂盒及方法

权利要求书

1.一种分离骨髓间充质干细胞的试剂盒，包括：

洗涤液，其为磷酸盐缓冲液；

培养液A，其为α-MEM液体培养基；

培养液B，其为胎牛血清，以及

细胞消化液，其为胰蛋白酶液。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述洗涤液、培养液A、培养液B以及细胞消化液是无菌的。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述洗涤液、培养液A、培养液B以及细胞消化液是独立包装。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述骨髓间充质干细胞源自哺乳动物。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述培养液B的技术指标如下：渗透压(240～340mOsmol/kg)、pH(7.0～7.5)、总蛋白含量(3～3.5/100ml)、血红蛋白(≤20mg/100ml)。

6.权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述培养液A与培养液B以9∶1的体积比来提供。

7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述磷酸盐缓冲液为0.01M，所述细胞消化液为质量/体积百分比浓度0.25％的胰蛋白酶液。

8.一种分离骨髓间充质干细胞的方法，包括：

(1)利用洗涤液冲洗骨髓腔得到细胞，经细胞培养混合液培养获得原代培养的骨髓间充质干细胞；

(2)利用洗涤液冲洗步骤1)获得的骨髓间充质干细胞，随后用细胞消化液消化，经传代培养获得传代培养的骨髓间充质干细胞；和

(3)利用细胞消化液对步骤2)获得的传代培养的骨髓间充质干细胞进行消化，获得分离的骨髓间充质干细胞，

其中洗涤液为磷酸盐缓冲液；

细胞培养混合液为按照9∶1体积比来配制的培养液A与培养液B，其中培养液A为α-MEM液体培养基，培养液B为胎牛血清；以及

细胞消化液胰蛋白酶液。

9.根据权利要求8所述的方法，其中在步骤(1)中，采用24小时半量更换细胞培养混合液。

10.根据权利要求8所述的方法，其中在步骤(2)中，传代培养使细胞密度达到90％。