[发明专利]一种测定华蟾素醇沉液中吲哚类生物碱含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于中药生产过程的质量检测方法，涉及一种近红外光谱技术快速测定华蟾素注射液醇沉工艺过程中醇沉液吲哚类生物碱含量的检测方法。

背景技术

华蟾素注射液是干蟾皮经提取制成的灭菌水溶液，具有消肿、止痛、解毒的功效，主要用于治疗中、晚期肿瘤，慢性乙型肝炎等症，还可以用于急性血播型肺结核、流行性出血热、顽固性呃逆和小儿流腮并发脑膜炎等症。由于华蟾素注射液具有较好的抗癌作用，目前被列为国家基本医疗保险药品甲类和国家中药保护品种。

华蟾素注射液的生产工艺流程由提取、浓缩、醇沉等多个工艺组成。醇沉法是中药注射剂生产的关键单元操作，主要可以去除蟾皮提取液中多肽、脂肪酸、甾醇等大分子化合物，达到有效成分的纯化和富集。目前相关报道中，“华蟾素胶囊的制造方法”(专利申请号：98103562.0)和“一种新的华蟾素冻干粉针及其制备方法和质量控制方法”(专利申请号：200510061288.4)提出了水提醇沉的方法，最大程度的获得吲哚类总生物碱。但以上研究方法只是对工艺优化和最终醇沉产品进行含量测定，缺乏对生产过程的快速检测和优化控制。

中药部颁标准中采用分光光度法，以5-羟色胺为对照品，二甲氨基苯甲醛盐酸为显色剂的华蟾素注射液中吲哚类总生物碱的含量测定方法。“蟾皮总碱及其制备和分析方法以及其制剂”(专利申请号：200710020339.8)建立了反相高效液相法测定蟾皮总碱的方法。但是以上方法耗时、繁琐，远不能满足中药生产过程的实时分析和快速测定的要求。

近红外光谱技术是一种快速无损的绿色分析技术，其分析速度快、样品处理简单、无需消耗试剂等特点，广泛应用在中药生产的提取、浓缩、混合、大孔树脂纯化等多个单元操作中。作为适用于快速检测和在线分析的成熟手段之一，近红外光谱技术已经应用在多种中药制剂中。“一种中药六味地黄丸生产过程的近红外光谱在线检测方法”(专利申请号：200910195764.X)针对六味地黄丸水提和醇提工艺，建立了近红外在线检测的定量模型，解决了传统离线方法成本高、效率低等问题。“复方杜仲胶囊有效成分的近红外光谱在线检测方法”(专利申请号：201010118938.5)中建立近红外数学模型，对生产的工艺关键点如动态逆流提取、三效浓缩、喷雾干燥等进行有效成分的检测。但目前报道中，极少将近红外光谱技术应用在醇沉过程中有效成分的快速分析。本发明将近红外光谱技术应用于华蟾素注射液醇沉过程中吲哚类生物碱的测定，可以实现指标成分的实时监测，最大程度降低批次间的差异性，有助于提高中药产品的稳定性、安全性和有效性。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种测定华蟾素醇沉液中吲哚类生物碱含量的方法；本方法通过预先建立华蟾素醇沉液中吲哚类生物碱的近红外数学模型，并将此模型用于醇沉过程中吲哚类生物碱的定量分析，实现对整个过程的快速分析，以提高过程单元的质量监测力度，达到保证最终产品质量的目的。

本发明的目的是通过以下技术方案实现：

(1)校正集醇沉液样本的收集：

收集不同批次华蟾素醇沉过程中获取的不少于50份的华蟾素醇沉液样本；

(2)校正集醇沉液样本吲哚类生物碱含量参照值的测定：

采用紫外可见分光光度法测定华蟾素醇沉液样本中吲哚类生物碱(以5-羟色胺计)的含量，并将此含量作为对照值；

(3)校正集醇沉液样本的近红外透射光谱的采集：

使用近红外光谱仪在光谱扫描范围4000～10000cm^-1扫描采集的醇沉液样本，每份样本多次测量求其平均光谱；

(4)校正模型的建立：

模型建立前对校正集光谱进行异常点判别以提高模型精度，同时原始光谱在平滑、微分等合适的光谱预处理方法下来消除仪器背景或漂移对信号的影响，选择合适的波段提取有效信息，减少计算量，缩短建模时间；即筛选近红外光谱预处理方法，选择建模波段，确定最佳主因子数，运用化学计量学软件处理数据，应用偏最小二乘法(PLS)建立醇沉液样本吲哚类生物碱的近红外定量分析模型；

(5)未知样本的吲哚类生物碱的快速测定：

重新收集华蟾素醇沉过程中未知样本，使用近红外光谱仪在光谱扫描范围4000～10000cm^-1测量其近红外光谱数据，按照校正模型中相同的光谱预处理方法和波段处理，输入到已建立的近红外校正模型中，经过模型计算和预测即可得知未知样本中吲哚类生物碱的含量信息。