[发明专利]一种转基因水稻Bt蛋白cry2a的原核表达及纯化方法无效
| 申请号： | 201010578641.7 | 申请日： | 2010-12-08 |
| 公开（公告）号： | CN102094039A | 公开（公告）日： | 2011-06-15 |
| 发明（设计）人： | 唐雪明;赵凯;刘启文;杨奇;吴潇;朱宏;谭芙蓉;王金斌;陶世如;蒋玲曦;程凯;魏曼曼 | 申请（专利权）人： | 上海市农业科学院 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N1/21;C12P21/02;G01N33/68;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海开祺知识产权代理有限公司 31114 | 代理人： | 费开逵 |
| 地址： | 201106 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 转基因 水稻 bt 蛋白 cry2a 表达 纯化 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种转基因水稻Bt蛋白cry2a的原核表达方法，包括以下步骤：
1)根据华中农业大学测序好的cry2a的基因，以及所要连接的载体PMD18-T的多克隆位点设计正、反向引物，进行PCR扩增和回收，并对PCR回收物进行DNA连接反应；
2)大肠杆菌感受态细胞的制备和转化；
3)表达质粒的重组构建、重组菌的诱导表达。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的正、反向引物序列如SEQ ID No1和SEQ ID No 2所示，具体如下：
正向引物：5’-CGGGATCC(BamHI)ATGAACAACGTGCTGAACAGCGGCAG-3’；
反向引物：5’-CGGAATTC(EcoRI)TTAGTAGAGTGGCGGCAGGTTGGTG-3’。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述大肠杆菌感受态细胞为E.coliDH5α和E.coil Transetta(DE3)。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，通过Ni-NTA亲和层析进行表达蛋白的进一步纯化。
5.如权利要求1所述的方法制备的转基因水稻Bt蛋白cry2a在胶体金免疫层析试纸条中的应用。
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