[发明专利]一种蜡样芽孢杆菌及其多阶段发酵方法

权利要求书

1.一种蜡样芽孢杆菌，其分类命名为蜡样芽孢杆菌，菌种的拉丁学名是Bacilluscereus，参据的微生物：NJYH 63305，保藏日期是2010年11月15日，保藏中心登记入册编号是CGMCC No.4348。

2.一种利用权利要求1所述的蜡样芽孢杆菌进行多阶段发酵生产的方法；其具体步骤如下：利用蜡样芽孢杆菌培养发酵种子液；将发酵培养基进行接种前准备、灭菌；然后将发酵种子液按发酵培养基体积的2-10％比例接种于发酵培养基，通过控制葡萄糖的浓度进行有氧多阶段发酵，得到蜡样芽孢杆菌的菌体。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述的培养发酵种子液为从肉汤培养基上挑1-2个蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus菌落到装种子培养基的三角瓶中，装液量为三角瓶体积的10-20％，在温度30-40℃，pH为6.5-8.5，转速为160-200rpm的摇床中培养10-20h，得到种子培养液。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述的种子培养基组成为(g/L)：蛋白胨5.0-10.0，酵母膏3.0-8.0，NaCl 3.0-8.0，葡萄糖5.0-20.0。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述的发酵培养基接种前准备为：将发酵培养基溶于60-80℃热水中，搅拌均匀，倒入发酵罐中，通入冷却水，灭菌，灭菌前校正溶解氧DO为0％；其中所述的发酵培养基的组分(g/L)：蛋白胨5.0-15.0，酵母膏3.0-8.0，NaCl 3.0-8.0，葡萄糖5.0-20.0，KH₂PO₄ 1-5，MgSO₄·7H₂O 0.1-1.5，CaCO₃ 1.0-5.0，FeSO₄·7H₂O 0.005-0.025，ZnSO₄·7H₂O0.005-0.025，MnCl₂·4H₂O 0.001-0.005，CoCl₂·6H₂O 0.001-0.005。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述的接种过程中发酵培养基的培养温度30-40℃，控制pH6.5-8.5；调节好转速、空气流量及罐压以校正溶氧DO100％；所述的有氧多阶段发酵为：发酵过程的前4～18h为菌体生长阶段，空气流量为10-15L/min，搅拌速度为300-400rpm，溶氧水平DO控制在50-100％；发酵过程的18h之后是芽孢形成阶段，当细胞光密度(OD₆₀₀)达到25-32时，转入微氧发酵阶段，调节空气流量为16.0-20.0L/min，搅拌速度为200-300rpm，溶解氧水平控制在20-30％。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在有氧多阶段发酵过程中，当葡萄糖浓度低于2g/L时，开始流加底物，并以发酵液中葡萄糖的浓度来指导底物流加速度，使发酵罐内葡萄糖浓度控制在2-3g/L范围内发酵8-15h；其中流加底物组成为(g/L)：葡萄糖250-350，酵母膏100-200，KH₂PO₄ 5-10。