[发明专利]一种蜡样芽孢杆菌及其多阶段发酵方法

说明书

技术领域

本发明属于发酵工程技术领域，具体涉及一种高活力蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus CGMCCNo.4348。

背景技术

蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)为革兰氏阳性菌，广泛分布于自然界，常存在于空气、尘埃、土壤、水、动植物中，有时正常人的肠道中也能检出。蜡样芽孢杆菌可单独制成微生态制剂，用于胃肠道疾病的防治、降血脂、抗衰老、防止细菌移位、抗肿瘤及自身免疫性疾病防治，如能效改善肝硬化患者肠道菌群失调，并可降低血清LBP浓度，可以作为肝硬化患者的辅助治疗措施。还可以和其他菌、试剂复配，如核黄素与蜡样芽孢杆菌复配，不但可以为严重烧伤病人提供大量核黄素，还能更有效的保护肠道黏膜应激性损害。在畜禽养殖业和水产养殖业种，蜡样芽孢杆菌作为饲料添加剂得到广泛的应用。在仔猪饲料中加入蜡样芽孢杆菌饲料添加剂能提高仔猪的机体免疫能力，降低仔猪下痢发病率，同时能促进仔猪生长；使用含蜡样芽孢杆菌制剂的饲料同样能提高鱼虾贝类等的产率、增重率，降低发病率和死亡率。

蜡样芽孢杆菌作为微生态制剂，主要是通过其所含活菌的积极生命活动而达到调节宿主微生态平衡的，因此其制剂中活菌含量的高低是评定产品质量的一项关键指标。液态微生态制剂在贮存及保藏过程中存在体积与重量大等种种不利因素，所以产品需要经过进一步的加工处理(离心、干燥、制粒或胶囊化等)，同时菌体需能适应消化系统复杂的环境条件，能进行新陈代谢活动。针对当前蜡样芽孢杆菌制剂普遍存在产品有效期不长、货架期短的问题，如能建立起一套系统的多阶段发酵生产蜡样芽孢杆菌的方法，特别对加工及贮存过程中蜡样芽孢杆菌活力的保持进行深入研究，为其他微生态制剂的发酵生产提供模板。

发明内容

本发明目的在于提供一种蜡样芽孢杆菌；本发明的另一目的还提供了多阶段发酵方法在蜡样芽孢杆菌培养中的应用。

本发明的技术方案为：一种蜡样芽孢杆菌，其分类命名为蜡样芽孢杆菌，菌种的拉丁学名是Bacillus cereus，参据的微生物：NJYH63305，保藏日期是2010年11月15日，保藏中心登记入册编号是CGMCC No.4348。

本发明还提供了多阶段发酵方法在蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus CGMCC No.4348培养中的应用。

一种利用上述的蜡样芽孢杆菌，多阶段发酵生产的方法，其具体步骤如下：利用蜡样芽孢杆菌培养发酵种子液；将发酵培养基进行接种前准备灭菌；然后将发酵种子液按发酵培养基体积的2-10％比例接种于发酵培养基中，通过控制葡萄糖的浓度进行有氧多阶段发酵，得到蜡样芽孢杆菌的菌体。

所述的发酵种子液为从肉汤培养基上挑1-2个蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus菌落到装种子培养基的三角瓶中(装液量为三角瓶体积的10-20％)，在温度30-40℃，pH为6.5-8.5，转速为160-200rpm的摇床中培养10-20h，得到种子培养液。

上述的种子培养基组成为(g/L)：蛋白胨5.0-10.0，酵母膏3.0-8.0，NaCl 3.0-8.0，葡萄糖5.0-20.0。

所述的发酵培养基接种前准备为：将发酵培养基溶于60-80℃热水中，搅拌均匀，倒入发酵罐中，通入冷却水，灭菌，灭菌前校正溶解氧DO为0％；其中所述的发酵培养基的组分(g/L)：蛋白胨5.0-15.0，酵母膏3.0-8.0，NaCl 3.0-8.0，葡萄糖5.0-20.0，KH₂PO₄ 1-5，MgSO₄·7H₂O0.1-1.5，CaCO₃ 1.0-5.0，FeSO₄·7H₂O 0.005-0.025，ZnSO₄·7H₂O 0.005-0.025，MnCl₂·4H₂O0.001-0.005，CoCl₂·6H₂O 0.001-0.005。