[发明专利]一种磁珠富集法筛选芒属植物SSR标记的制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于芒属植物育种技术领域，更具体涉及一种磁珠富集法筛选芒属植物SSR标记的制备方法，同时还涉及一种磁珠富集法筛选的芒属植物SSR标记的用途。

背景技术

芒属(Miscanthus)植物俗称芒草，属禾本科多年生高大草类。由于芒草不属于粮食作物，同时其主要生长在荒地上，所以作为能源植物的芒草就受到世界范围的广泛关注。各国纷纷出台相应的政策措施，以期在能源植物的开发和研究上走在前列。美国总统奥巴马在公布一项旨在复兴美国生物燃料生产的新型战略时，就“誓言决不让中国等国家在构建新能源经济时跑在前列”。中国是世界芒类植物资源的分布中心，因此，更应该重视和加强芒类资源的研究利用工作。芒属植物不仅在生物能源领域拥有巨大的经济价值，同时在生态环保、农业、工业方面都具有很大的开发潜力和市场价值。五节芒(Miscanthus floridulus)是日常生活之中最常见的野外群生禾本科植物，是目前芒属植物中研究较多的一种。它在山坡土、道路边、溪流旁及开阔地成群滋长，其地下茎发达，能适应各种土壤。但是对于五节芒的遗传学研究较少，特别是DNA分子水平的研究极为有限。

微卫星(Microsatelltie)DNA又称简单重复序列(simple sequence repeat，SSR)，是一种由1-6个核苷酸为重复单位串联组成的长达几十个核苷酸的序列，微卫星具有十分丰富的多态性，且重复性好、呈共显性遗传、数量丰富和遍布整个基因组等优点。这些优点使得SSR标记成为广泛使用的分子标记之一。分离微卫星的位点有许多种方法，例如部分文库法、富集文库法、微卫星序列PCR分离法、EST-SSR法等。由于磁珠富集法具有高效富集微卫星DNA的作用，且不需要较多的因而被广泛地运用于微卫星位点的筛选。

为了研究芒属植物的遗传多样性，申请人利用磁珠法富集分离了芒属植物五节芒的SSR序列，并从中开发了SSR引物序列，并明确了这些SSR序列的特征及其在芒属植物遗传多样性研究中的应用。

发明内容

本发明的目的是在于提供了一种磁珠富集法筛选芒属植物SSR标记的制备方法，方法易行，所需设备简单，操作简便，在不需要了解测试样品较多的遗传背景信息的情况下，能够高效富集和分离微卫星DNA，从而分析获得其特异的SSR序列引物序列。

本发明的另一个目的是在于提供了一种磁珠富集法从芒属植物五节芒筛选的SSR标记在分析芒属植物遗传多样性中的应用，在芒属植物分子遗传学研究中所需的一种新的DNA分子标记，所得到的SSR引物为芒属植物特异的引物，具有较高的针对性，同时由于SSR标记自身具有的优点如数量丰富，具有多等位基因的特性，呈共显性等，不仅能够用于芒属植物遗传多样性和亲缘关系分析，还可以运用到芒属植物遗传图谱的构建、目标基因的标定、指纹图的绘制等研究中。

为了达到上述的目的，本发明采用以下技术措施：

一种磁珠富集法筛选芒属植物SSR标记的制备方法，其步骤是：

1、取芒属植物五节芒幼嫩叶片提取总DNA；具体方法参照1998年顾红雅等(顾红雅，瞿礼嘉.植物分子生物学实验手册[M].北京：高等教育出版社，1998，3～12.)报道的方法提取。