[发明专利]一种提高米根霉产酸能力的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种提高米根霉(Rhizopus oryzae)产酸能力的方法，特别是一种通过降低无机离子的浓度来调节R.oryzae菌体菌落形态，从而提高产酸的方法，属于发酵工程领域。

背景技术

R.oryzae在分类上属于毛霉目，根霉属；广泛运用于有机酸、酶、抗体、低胆固醇的生产过程中。R.oryzae在深层发酵过程中主要呈现三种菌落形态：丝状、团状及颗粒状。由于R.oryzae菌丝体之间的引力作用，菌丝间相互缠绕，最终菌落形态由丝状变成团状。而团状的R.oryzae在发酵过程中，影响物质和氧的传递。以颗粒状存在的R.oryzae菌落形态稳定，可从发酵液中轻松分离得到，并能重复利用进行菌体发酵。此外，颗粒状存在的R.oryzae有助于发酵过程中营养物质和氧的传递。

Zn²⁺、Mg²⁺及K⁺等金属离子，作为菌体生长过程中所需酶的辅基，具有促进菌体生长的作用，而过度生长的菌丝体相互缠绕，容易形成菌丝团。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种提高米根霉(Rhizopus oryzae)产酸能力的方法。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案：控制培养基中其它成分的浓度不变，降低金属离子Zn²⁺、Mg²⁺及K⁺的浓度，使R.oryzae菌落呈现颗粒状。

发酵用米根霉(R.oryzae)购买于美国农业研究菌种保藏中心(Agricultural Research ServiceCulture Collection，NRRL 3563)。

发酵产酸条件：将30℃条件下培养7d的孢子斜面用无菌水洗下，以4％的种量接种种子培养基(50mL/250mL)三角瓶，30℃、200r/min培养30h，定时取样观察菌落形态，然后以10％的接种量接种发酵培养基，发酵72h，结束发酵，取样测定产酸量。

涉及的培养基：

产孢子培养基(g/L)：葡萄糖4.0，乳糖6.0，甘油10.0，玉米浆1.0，尿素0.6，蛋白胨1.6，MgSO₄·7H₂O 0.3，ZnSO₄·7H₂O 0.088，FeSO₄·7H₂O 0.25，硫酸铜0.005，KH₂PO₄0.4，MnSO₄·4H₂O 0.05，KCl 0.4，NaCl 40，琼脂20。

种子培养基(g/L)：种子培养基(g/L)：葡萄糖20，大豆蛋白胨6，CaCO₃6。

优选种子培养基(g/L)：葡萄糖20，大豆蛋白胨6，CaCO₃6，KH₂PO₄0.3，MgSO₄·7H₂O0.125，ZnSO₄·/H₂O 0.044。

发酵培养基(g/L)：葡萄糖100，(NH₄)₂SO₄2，KH₂PO₄0.3，MgSO₄·7H₂O 0.4，ZnSO₄·7H₂O 0.044，FeSO₄·7H₂O 0.01，CaCO₃80，甲醇15。

所有的培养基由去离子水配制后，121℃，15min灭菌。

菌落形态鉴定：将培养到一定时期的R.oryzae菌体倒在培养皿上，Sony相机拍照，观察菌落形态。

延胡索酸含量的测定：采用高效液相色谱(HPLC)测定。色谱柱：Aminex HPX-87H(Bio-Rad)，流动相：0.005M H₂SO₄，流速：0.5mL/min，柱温：35℃，进样量：5μL，检测器：示差折光检测器。