[发明专利]一种截短侧耳素的提取纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种兽药的提取纯化方法，具体涉及一种截短侧耳素的提取纯化方法，属于药物制备技术领域。

背景技术

截短侧耳素(Pleuromutilin)是由侧耳菌(Pleurotus mutilus)产生的一类广谱的二萜烯类抗生素，它通过作用于细菌核糖体50S亚基，抑制蛋白质合成，导致菌体死亡。截短侧耳素类是一大类具有较好抗菌活性的抗生素家族，主要用作家禽和家畜的饲料添加剂，在饲料中添加该类物质，可有效预防许多传染病，例如能够有效抑制革兰氏阳性菌，尤其以葡萄球菌、链球菌最为明显，同时对于支原体感染也有治疗作用。截短侧耳素还用作截短侧耳素类半合成衍生物的前体，目前已有衍生物泰妙菌素和沃尼妙林，它的许多衍生物的抑菌活性和范围比截短侧耳素强，同时抗菌谱更广泛。

专利200510122954.0公开了一种泰妙菌素合成过程中用的截短侧耳素原料的制备方法，专利201010180181.2公开了一种截短侧耳素的溶剂提取工艺，专利200910073722.9公开了一种截短侧耳素提取工艺，专利200810046089.X公开了一种高纯度截短侧耳素原料的发酵提取制备方法。在这些工艺中一般采用乙酸丁酯或甲醇、乙醇浸提截短侧耳素，也有采用甲基异丁基甲酮作为浸提剂，这些方法虽然提取率高，但是所得产品带有杂质，其纯度不高，且不易纯化。

发明内容

本发明针对上述不足，提供了一种截短侧耳素的提取纯化方法，该方法能够提高截短侧耳素的提取率，且所得产品纯度高，在98%以上。

本发明是通过以下措施实现的：

一种截短侧耳素的提取纯化方法，其特征是包括以下步骤：

（1）   截短侧耳素粗品提取

将截短侧耳素干菌丝用甲基异丁基甲酮浸取多次，浸取后压滤得浸取液，浸取液浓缩、结晶、过滤、干燥得截短侧耳素粗品；

（2）   纯化

2.1将截短侧耳素粗品加入甲醇水溶液中，搅拌至全溶；

2.2将上述溶液减压浓缩，浓缩至溶液沸点明显升高，馏出物基本无甲醇为止；

2.3向浓缩液中加入石油醚进行搅拌萃取，静置分层后进行分离，取水相，水相再次加入石油醚进行搅拌萃取，静置分层后分离得水相；

2.4将水相加入乙酸丁酯进行搅拌萃取，静置分层进行分离，取水相再次用乙酸丁酯萃取，两次萃取的乙酸乙酯相合并进入下一步；

2.5将上述乙酸乙酯相在浓缩结晶罐中进行真空蒸发，浓缩至溶液粘稠、基本无溶剂蒸出为止，然后向浓缩液中加入乙醚，逐渐降温至0-4℃，在此温度下结晶； 

2.6晶体完全析出后，将结晶分离，用冷乙醚洗涤，洗涤后过滤、干燥；

2.7将干燥后的晶体用乙酸乙酯溶解，用活性炭脱色，然后溶液滤去活性炭，采用步骤2.5、2.6的方法进行浓缩、结晶、过滤、干燥得截短侧耳素。

上述提取纯化方法中，截短侧耳素粗品提取的具体步骤为：

1.1向截短侧耳素干菌丝中加入甲基异丁基甲酮浸取三次，浸取后压滤，将三次所得的浸取液合并，第一次浸取所用截短侧耳素（g）与 甲基异丁基甲酮(ml)的比值为1：3-5，后两次浸取所用截短侧耳素（g）与甲基异丁基甲酮(ml)的比值为1：2-4，每次浸取时间均为1h；

1.2浸取液用降膜浓缩器浓缩至晶体含量为15～20wt%，然后转入结晶罐，在缓慢搅拌条件下，以5～10℃/h的降温速度降至0-4℃，保温至晶体完全析出；

1.3将晶体分离，用预冷的甲基异丁基甲酮洗涤，然后过滤，用真空干燥器干燥至晶体含湿量≤2%得截短侧耳素粗品；

1.4将结晶母液和甲基异丁基甲酮洗涤液合并，浓缩至截短侧耳素含量≥20%，然后降温结晶、甲基异丁基甲酮洗涤得截短侧耳素粗品，与步骤1.3中粗品混合，浓缩所得的甲基异丁基甲酮循环利用。

上述提取纯化方法中，步骤2.1中，截短侧耳素粗品（g）与甲醇水溶液(ml)的比值为1:8-15，甲醇水溶液的浓度为50-70体积%。

上述提取纯化方法中，步骤2.3中，第一次萃取时，石油醚的加入量为浓缩液的30-50体积%，第二次萃取时，石油醚的加入量为水相的30-50体积%，萃取时间均为15min。

上述提取纯化方法中，步骤2.4中，两次萃取乙酸乙酯的加入量（ml）为截短侧耳素粗品（g）的8-15倍，萃取时间为30min。

上述提取纯化方法中，步骤2.5中，乙醚的加入量（ml）为浓缩液（g）的8-15倍，降温速度为5～10℃/h。