[发明专利]一种纯化重组人胰岛素原的方法

权利要求书

1.一种纯化重组人胰岛素原的方法，其特征在于包含以下步骤，

a.大孔吸附树脂层析：

用乙酸调pH为3.0～5.0的去离子水平衡大孔吸附树脂，将盐酸调pH为3.0～5.0的重组人胰岛素原复性液上样至大孔吸附树脂层析柱，上样流速为200～500cm/h，再用乙酸调pH为3.0～5.0的去离子水清洗5～10个柱体积，清洗流速为200～500cm/h，最后用乙酸调pH为3.0～5.0、浓度为65％～95％的乙醇解吸附洗脱，洗脱流速为50～200cm/h，收集解吸附洗脱液；

b.阳离子交换树脂层析：

大孔吸附树脂层析得到的解吸附洗脱液与去离子水等体积混合后用盐酸调pH为5.0～7.0，室温静置1～2小时后出现絮状沉淀，离心取上清液并用盐酸复调pH为3.0～5.0；

先用乙酸调pH为3.0～5.0的去离子水平衡阳离子交换树脂，将pH为3.0～5.0的上清液上样至阳离子交换树脂层析柱，上样流速为50～200cm/h，再用乙酸调pH为3.0～5.0的去离子水清洗5～10个柱体积，清洗流速为50～200cm/h，最后用pH为8.5～10.5、0.1mol/L的碳酸氢铵洗脱，洗脱流速为50～200cm/h，收集洗脱液。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤a中所述大孔吸附树脂为D-101、AB-8、D1300、X-5型大孔吸附树脂。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤a中所述大孔吸附树脂层析柱的径高比为1∶5～20。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤a中大孔吸附树脂层析上样、清洗过程中的流速为300～400cm/h。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤a中大孔吸附树脂层析洗脱过程中的流速为100cm/h。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤a中从大孔吸附树脂上解吸附洗脱的乙醇浓度为85％～95％。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤b中层析柱填料为SP Sepharose FastFlow。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤b中的上样、清洗、洗脱过程中的流速为100cm/h。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤b中洗脱过程中碳酸氢铵的pH为9.0～10.0。