[发明专利]一种由苏云金杆菌发酵液制备活性毒素的方法

权利要求书

1.一种由苏云金杆菌发酵液制备活性毒素的方法，其特征在于按照下列步骤操作：

（1）将苏云金芽胞杆菌发酵液装入离心管，高速离心去除上清液，得到胞晶混合物沉淀物；

（2）将步骤1所得的胞晶混合物沉淀物，用去离子水调配成固形物含量的重量与体积比为5%-15%的悬浮液，在搅拌下水浴升温，在30-60℃条件下滴加1mol/L NaOH溶液，维持溶解体系的pH在10—12之间，碱解4—5 h，得到伴胞晶体的碱溶解液； 或者：

将步骤1所得的胞晶混合物沉淀物，直接用0.01-0.05 mol/L碳酸钠溶液调配成悬浮液，固形物含量的重量与体积比在5%-15%之间，在搅拌下升温，在30-60℃条件下碱解4—5 h；碱解期间用0.5mol/L Na₂CO₃溶液调节悬浮液pH在10—12之间；

（3）将步骤2所得的伴胞晶体的碱溶解液离心去沉淀，收集上清液；

（4）将步骤3所得的上清液用截留分子量≤60kDa的离心过滤装置过滤，滤除小分子物质；

（5）收集步骤4中被截留的活性毒素，采用等电点法对活性毒素进行沉淀；

（6）步骤5所得的活性毒素沉淀用去离子水洗涤，离心脱水后冷冻干燥，得浅棕色粉末。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤（5）所述被截留的活性毒素用pH 10—12的碱液清洗处理，碱液是氢氧化钠溶液或是碳酸钠溶液；所得活性毒素的碱性溶液用重量比10%-20% 的盐酸溶液中和，或者重量与体积比在10%-30%的醋酸溶液中和至pH 4-5，转入4oC冰箱静置沉降4-8 h。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于步骤（6）所述沉淀的活性毒素用去离子水洗涤的步骤是：活性毒素沉淀静置完成后小心倾出部分上清液，剩余部分悬液搅拌均匀，分装离心管，在6000-12000 r/min离心20 min，去掉清液，毒素沉淀用去离子水洗涤3-6次。